[发明专利]一种定量分析壳聚糖的荧光猝灭法

说明书

本发明属于检测技术领域，具体公开了一种定量分析壳聚糖的荧光猝灭法。本发明首先研究了弱酸环境下活性红4与壳聚糖缔合后的光谱特征，及其在壳聚糖定量分析中的应用。结果表明在弱酸性B‑R缓冲体系中，壳聚糖对活性红4存在荧光猝灭作用，在λex/λem=285nm/341nm波长处，0.050～2.00µg/mL的浓度范围内，其荧光猝灭程度与壳聚糖浓度呈良好的线性关系。线性方程为：ΔF=68.78c+2.648（c，μg/mL），R²=0.9992，检出限为0.039μg/mL。据此，建立了以活性红4为探针定量分析壳聚糖的荧光猝灭法，该方法的回收率为96.27～105.3%。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，更具体地，涉及一种定量分析壳聚糖的荧光猝灭法。

背景技术

壳聚糖（CTS）是甲壳素脱乙酰基产物，其化学名称为聚葡萄糖胺(1，4)-2-氨基-2-脱氧-D-葡聚糖，是自然界含量仅次于纤维素的第二大天然有机高分子化合物。它是甲壳类(虾、蟹) 动物、昆虫的外骨骼的主要成分。壳聚糖及其衍生物是重要的生物活性物质，具有抗肿瘤，抗凝血，减肥降脂和增强免疫力等功能，可作为医药保健品、食品、化妆品等的添加剂及制备人造皮肤和手术缝合线等的重要原料。因此，壳聚糖在生物医学，环境卫生和食品等领域都有着广阔的应用前景。

随着壳聚糖广泛应用，壳聚糖的准确定量显得十分重要。目前，国内外用于壳聚糖定量分析的方法主要集中在分光光度法和荧光法。目前，光谱法测定壳聚糖普遍忽略了壳聚糖作为高分子天然产物，其分子量从几千到百万不等，当样品中壳聚糖分子量与标准品差异较大时，可能会产生一定的系统误差，影响准确测定。

发明内容

本发明为了克服现有技术的上述不足，提供活性红4在作为定量分析壳聚糖的探针中的应用。

本发明的另一个目的是提供一种以活性红4为探针的定量分析壳聚糖的方法。

本发明的再一个目的是提供一种定量分析壳聚糖的荧光猝灭法。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

本发明首先研究了弱酸环境下活性红4与壳聚糖缔合后的光谱特征，及其在壳聚糖定量分析中的应用。结果表明在弱酸性B-R缓冲体系中，壳聚糖对活性红4存在荧光猝灭作用，在λex/λem=285nm/341nm波长处，0.050~2.00µg/mL的浓度范围内，其荧光猝灭程度与壳聚糖浓度呈良好的线性关系。线性方程为：ΔF =68.78c+2.648（c，μg/mL），R²=0.9992，检出限为0.039μg/mL。

据此，本发明要求保护活性红4在作为定量分析壳聚糖的探针中的应用。

另外，本发明还保护一种以活性红4为探针的定量分析壳聚糖的方法。

一种定量分析壳聚糖的荧光猝灭法，包括以下步骤：

标准曲线的绘制：配置n个成梯度浓度的壳聚糖溶液和1个空白试剂，向n个成梯度浓度的壳聚糖溶液和1个空白试剂中分别加入2倍体积的B-R缓冲溶液，然后再分别加入等体积的活性红4溶液，混合均匀后得到稀释后的成浓度梯度的壳聚糖待测溶液，静置后分别检测壳聚糖待测溶液的荧光强度，绘制标准曲线，进一步得线性方程：ΔF =68.78c+2.648（c，μg/mL）