[发明专利]铁皮石斛种子的小苗计数法

说明书

本发明公开了一种铁皮石斛种子的小苗计数法，将铁皮石斛的种子萌发生长成小苗，通过计算小苗的数量得到种子的数量。由于该法系将细微、难以采用常规的、直接肉眼分辨计数的铁皮石斛蒴果中的种子播在培养基表面，利用配制培养基丰富的营养成份，为铁皮石斛种子萌发及生长提供养料和水分，确保其蒴果保存的种子在培养基上基本可以成活，并让种子萌发生长成肉眼能清楚分辨和计数的一定大小的小苗，使之能直观、简便计数，则通过计数小苗数量即可得到种子的数量。本发明使用简便、实用性强、不需要借助其他较精密的显微仪器设备，就可以准确计数铁皮石斛蒴果中的种子数量，从而方便得出生产种苗的数量，这为大规模育苗和生产提供准确的指导和参考。

技术领域

本发明属于植物细微种子快速计数技术领域，尤其涉及一种铁皮石斛种子的小苗计数法。

背景技术

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)，兰科石斛属多年生草本植物，常用中药，为《中华人民共和国药典》所收载。分布于我国秦岭、淮河以南诸省区，生长在高山峻岭悬崖峭壁和岩石缝隙或深山古树上。铁皮石斛具有生津、止渴、镇痛、消除水肿之功效，主治热病阴虚、目暗、胃弱、声音嘶哑等疾病，对声带疲劳、声音嘶哑，恢复其美音有特殊疗效。铁皮石斛为濒危物种，属国家一级重点保护植物，其新鲜茎及炒制烘干后的铁皮枫斗都是名贵中药材。现代临床应用和药理研究证实，铁皮石斛具有滋阴润肺、养胃生津、健脑明目、保肝宁心、清热降火、补五脏之虚劳、轻身延年的神奇功效，对慢性疲劳综合症、肺病、冠心病、肾病、慢性肝病、高血压、高血脂、高血糖、糖尿病、慢性胃病、干燥综合症、癌症等疾病都有确切疗效和调理康复作用；增强肌体免疫力、抗氧化、抗衰老，对烟酒过度、劳累过度、夜生活过度、用眼用脑过度、声音嘶哑、口干舌燥、年老性体弱力衰阴虚等康复有特殊疗效。

铁皮石斛在自然状态下发芽率不及5％，繁殖率非常低，多以分株法繁殖，难以满足市场需求。现在铁皮石斛主要以种子为外植体，进行组织培养生产试管苗的方式进行繁育。铁皮石斛种子主要存在于蒴果中，蒴果长约1.8～2.2cm、直径0.5～0.8cm，内含有几万至十几万粒种子，细小如粉尘状，在显微镜下观察到种子结构非常简单，仅有一个简单的胚及单层细胞的翘状种皮结构，无胚乳，种子长×宽平均为126×84μm。由于铁皮石斛的种子很细微，很难把种子分离开来，用常规方法难以准确计数蒴果所含种子量，且种子在自然状态下不易保存，很容易失活。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种使用简便、实用性强的铁皮石斛种子的小苗计数法，以准确计数铁皮石斛蒴果中的种子数量，为石斛育苗提供准确的指导和参考。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术问题：铁皮石斛种子的小苗计数法，将铁皮石斛的种子萌发生长成小苗，通过计算小苗的数量得到种子的数量。

上述的铁皮石斛种子的小苗计数法，将铁皮石斛蒴果中的种子播在培养基表面使其萌发生长成小苗。

培养基组成为MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+200g/L马铃薯浸出液+20g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH5.8。

小苗平均株高大于等于5.0mm。

上述铁皮石斛种子的小苗计数法，包括以下步骤：

<1>培养基制备

按配方制备培养基，并用直径6cm、高10cm的平底玻璃瓶分装，每瓶装25ml，然后置121℃、1.1kg/cm²的压力下灭菌20min，待用；

<2>种子处理

铁皮石斛蒴果依次用洗洁精水溶液浸泡5min、自来水冲洗15-30min，然后在超净工作台上放入1g/LHgCl₂溶液中灭菌15min，无菌水冲洗5次后，无菌滤纸吸干果实表面水分，待用；