[发明专利]CYP3A5基因的检测引物组、其构成的反应体系及应用

权利要求书

1.一种CPY3A5基因的检测引物组，其特征在于，所述检测引物组如下：

正向外侧引物F3A：SEQ ID NO:1；

反向外侧引物B3A：SEQ ID NO:2；

正向内侧引物FIPA：SEQ ID NO:3；

反向内侧引物BIPA：SEQ ID NO:4；

正向外侧引物F3G：SEQ ID NO:5；

反向外侧引物B3G：SEQ ID NO:6；

正向内侧引物FIPG：SEQ ID NO:7；

反向内侧引物BIPG：SEQ ID NO:8；

所述SEQ ID NO:1-4所示的序列是用于检测rs776746位点的A等位基因；

所述SEQ ID NO:5-8所示的序列是用于检测rs776746位点的G等位基因；

FIP包含了F1c和F2，BIP包含了B1c和B2；

以特异性要求最严格的F1c的5’端针对rs776746位点设计等位基因特异引物，分别检测rs776746的A等位基因和rs776746的G等位基因；

通过分别在FIPA和FIPG的5’端第三位引进额外突变。

2.一种检测CYP3A5基因的反应体系，其特征在于，所述反应体系包括权利要求1所述的引物组，反应缓冲液，dNTPs，羟基萘酚蓝，甜菜碱，Bst DNA聚合酶，待检样品基因组DNA和去离子水；

所述反应缓冲液包括Tris-HCl，KCl，(NH₄)₂SO₄，MgSO₄和Tween-20。

3.根据权利要求2所述的反应体系，其特征在于，所述Tris-HCl的浓度为10-30mM，KCl的浓度为10-60mM，(NH₄)₂SO₄的浓度为5-13mM，MgSO₄的浓度为2-8mM，Tween-20的体积分数为0.1-1％，dNTPs的浓度为1-2mM，羟基萘酚蓝的浓度为108-130μM，甜菜碱的浓度为0.1-1M。

4.根据权利要求3所述的反应体系，其特征在于，所述Tris-HCl的浓度为15-25mM，KCl的浓度为50-55mM，(NH₄)₂SO₄的浓度为8-12mM，MgSO₄的浓度为2-6mM，Tween-20的体积分数为0.1-1％，dNTPs的浓度为1.2-1.8mM，羟基萘酚蓝的浓度为115-123μM，甜菜碱的浓度为0.5-0.8M。

5.根据权利要求4所述的反应体系，其特征在于，所述Tris-HCl的浓度为20mM，KCl的浓度为50mM，(NH₄)₂SO₄的浓度为10mM，MgSO₄的浓度为4mM，Tween-20的体积分数为0.1％，dNTPs的浓度为1.4mM，羟基萘酚蓝的浓度为120μM，甜菜碱的浓度为0.8M。

6.根据权利要求2-5中任一项所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系包括反应体系A和反应体系G，其中每个25μL反应体系含有以下组分：

缓冲液：

去离子水加至25μL。

7.一种检测CPY3A5基因的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如权利要求2所述的反应体系。