[发明专利]CYP3A5基因的检测引物组、其构成的反应体系及应用

说明书

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种CYP3A5基因的检测引物组及其构成的反应体系，所述检测引物组如下：正向外侧引物F3A：SEQ ID NO:1；反向外侧引物B3A：SEQ ID NO:2；正向内侧引物FIPA：SEQ ID NO:3；反向内侧引物BIPA：SEQ ID NO:4；正向外侧引物F3G：SEQ ID NO:5；反向外侧引物B3G：SEQ ID NO:6；正向内侧引物FIPG：SEQ ID NO:7；反向内侧引物BIPG：SEQ ID NO:8。本发明步骤简单、扩增反应快速、高效、特异性高、鉴定简便，使该技术有着更广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种CYP3A5基因的检测引物组、其构成的反应体系及应用。

背景技术

细胞色素P450(cytochromeP450或CYP450)简称CYP450，主要存在于肝脏、肠道中的单加氧酶，是人体内参与内源性物质和外源性化合物代谢过程的一组超家族酶类，尤其在药物的体内代谢过程中扮演重要角色。其中，CYP3A5参与他克莫司、咪达唑仑、氨苯砜、可的松、尼菲地平等多种药物的代谢。该基因的一个SNP，rs776746(CYP3A5*3，6986A>G)，会导致CYP3A5基因的mRNA过短地剪切，形成一个“不完整的”CYP3A5蛋白，从而导致CYP3A5酶蛋白活性的降低甚至消失。

据统计，CYP3A5*3等位基因在中国人群中出现的频率约为75％，而携带突变型等位基因的患者在临床药物治疗过程中的表现与野生型携带者大相径庭。例如，在临床器官移植术后使用的主要免疫抑制剂类药物他克莫司(tacrolimus，FK506)，其代谢过程主要由CYP3A5进行调控。如果CYP3A5基因出现突变，则会导致病人体内他克莫司的血药浓度大幅度增高，并出现肾毒性、神经毒性、高血压和胃肠道紊乱等一系列药物毒副作用。因此，在临床中检测CYP3A5基因分型对于临床治疗，特别是器官移植术后病人的临床用药治疗实现个体化安全用药具有重要的指导作用。

目前，关于CYP3A5基因分型的检测多采用荧光定量PCR，基因测序以及基因芯片等技术手段。CN 104498592 A公开了一种人CYP3A5基因检测方法，包括提供待测样品、核酸扩增体系和荧光检测体系混合物；通过扩增反应循环扩增靶多核苷酸；使荧光发生基团与被扩增的靶多核苷酸序列间接结合；测定荧光量；所述核酸扩增体系至少分别包含CYP3A5基因CYP3A5*1和CYP3A5*3多态性的特异性正向引物和反向引物。使用这些方法进行CYP3A5基因分型检测均不同程度存在购买仪器成本高，操作程序复杂，检测周期较长等问题，不利于提高检测效率并实现临床推广普及。然而，从目前来看，这种检测需求又非常巨大，因此，寻找一种高效且价格容易被患者接受的检测手段，对于CYP3A5基因分型检测有着重要的现实意义。

环介导的等温扩增(LAMP)技术是日本科学家于2000年提出的一种等温扩增技术，其主要特点是针对靶基因的6个区域设计4条特异引物，在链置换DNA聚合酶(Bst DNApolymerase)的作用下进行恒温扩增，仅需15-90分钟即可产生10⁹-10¹⁰数量级的产物。具有敏感性高、特异性好、操作简便、成本低廉且结果易于判定的优点。

发明内容

本发明为了克服上述方法的缺陷，提供一种CYP3A5基因的检测引物组、其构成的反应体系及应用，所述检测体系具有敏感性高、特异性好和操作简便等优点。

为达到此发明的目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种CYP3A5基因的检测引物组，所述检测引物组如下：

正向外侧引物F3A：SEQ ID NO:1：ATTATGGAGAGTGGCATAGG；

反向外侧引物B3A：SEQ ID NO:2：TTAGGGTGTGACACACAG；