[发明专利]一种异香豆素类化合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种异香豆素类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

曲霉属真菌广泛存在于自然界中。其中，米曲霉是一种能产生复合酶的菌株，该菌株除可产生蛋白酶外，还可产淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶等多种功能的酶，因而广泛应用于食品、饲料、酿酒等发酵工业。同时，米曲霉次生代谢产物也被认为是一个亟待开发的重要资源。从不同来源的米曲霉发酵产物中也分离得到了一系列具有生物活性的天然产物，包括了生物碱、多肽、萜类化合物以及多酚类化合物。如从海洋生物红藻Heterosiphoniajaponica中分离得到的米曲霉发酵产物中分离得到了一系列新颖的吲哚二萜类化合物asporyzinsA–C。

发明内容

本发明以百合科重楼属滇重楼(Parispolyphyllavar.yunnanensis)中分离得到的曲霉属内生真菌米曲霉的固态发酵物为原料，经有机溶剂提取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到一类新颖的异香豆素类化合物，值得一提的是，该化合物是从自然界中发现的第一个具有罕见2-羰基-丙基和3-羟基-丙基片段的异香豆素类化合物，同时，该化合物显示了一定的细胞毒活性和抗烟草花叶病毒活性。

本发明的第一目的是提供一种异香豆素类化合物；第二目的在于提供所述异香豆素类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述异香豆素类化合物的应用。

本发明的第一目的是这样实现的，所述的异香豆素类化合物是以百合科植物滇重楼(Parispolyphyllavar.yunnanensis)中得到的曲霉属真菌米曲霉(Aspergillusoryzae)的固体发酵物为原料，经有机溶剂提取、正反相硅胶柱层析富集、高压液相色谱分离获得，其分子式为C₁₅H₁₆O₅，命名为米曲霉素A，英文名为oryzaeinsA，其结构式为：

本发明的第二目的是这样实现的，是以百合科植物滇重楼(Parispolyphyllavar.yunnanensis)中得到的曲霉属真菌米曲霉(Aspergillusoryzae)的固体发酵物为原料，经有机溶剂提取、正反相硅胶柱层析富集、高压液相色谱分离获得，具体为：

A、内生真菌米曲霉(Aspergillusoryzae)的分离：将75%乙醇消毒后的百合科重楼属滇重楼(Parispolyphyllavar.yunnanensis)茎秆和/或叶片放入无菌的研钵中进行研磨，研磨后转入无菌的塑料管内，1000~3000rpm离心2~10min，吸取1~100微升上清液，涂布在BL平板上，倒置于培养箱中，25~30摄氏度黑暗培养2~10天，反复挑取单菌落培养并编号保存菌种，直到获得单一内生真菌菌落，经ITS测序(GenbankAccessionnumberKM999948，GTGCATCGTACGTAGGTCTAGCGAGCCCACCTCCCACCCGTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCATGGCCGCCGGGGGCTCTCAGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTGTCTGATCTAGTGAAGTCTGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCTCTCCGGGGGGGACGGGCCCCAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCTTGCCGAACGCAAATCAATCTTTTTCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAAGCCGGAGGAA)确定为曲霉属真菌米曲霉(Aspergillusoryzae)，其曲霉属真菌米曲霉见附图4；