[发明专利]一种高效表达中华绒螯蟹抗脂多糖因子的酿酒酵母工程菌在审
| 申请号： | 201510791228.1 | 申请日： | 2015-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN105255750A | 公开（公告）日： | 2016-01-20 |
| 发明（设计）人： | 蒋伶活;杜婕 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12P21/02;C12R1/865 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 耿晓岳 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 表达 中华 绒螯蟹抗脂 多糖 因子 酿酒 酵母 工程 | ||
1.一种高效表达中华绒螯蟹抗脂多糖因子的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述基因工程菌的构建方法是将中华绒螯蟹抗脂多糖因子EsALF的cDNA克隆至表达质粒pHAC181上得到测序验证正确的重组质粒pHAC181-EsALF，然后设计同源重组引物，利用同源重组技术将目的基因EsALF整合至酿酒酵母宿主菌株的GAL1启动子下游。
2.根据权利要求1所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述EsALF的cDNA的CDS区域翻译后的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。
3.根据权利要求1所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述EsALF的cDNA的CDS区域的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
4.根据权利要求1所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述pHAC181是在YCplac181的SphI和EcoRV位点插入3个组氨酸标签得到的。
5.根据权利要求1所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述酿酒酵母工程菌是按照如下方法构建得到的：(1)以中华绒螯蟹组织的cDNA为模板PCR扩增或者直接化学合成，得到核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的EsALF基因片段；(2)将EsALF基因片段克隆到表达质粒pHAC181上，得到重组表达质粒pHAC181-EsALF；(3)设计同源重组引物，对质粒pHAC181-EsALF进行扩增，得到含有EsALF基因的核苷酸片段，使用同源重组的方法，将该核苷酸片段整合至酿酒酵母菌株中GAL1启动子下游。
6.一种高效表达中华绒螯蟹抗脂多糖因子的方法，其特征在于，所述方法是使用权利要1-5任一所述酿酒酵母工程菌为生产菌株。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法是将酿酒酵母工程菌活化后，接种于YPG培养基中，在半乳糖的诱导下培养6h；所述YPG培养基含有D-半乳糖20g/L、蛋白胨20g/L、酵母提取物10g/L。
8.权利要求1-5任一所述酿酒酵母工程菌生产得到的抗脂多糖因子。
9.权利要求1-5任一所述酿酒酵母工程菌在水产养殖或水产免疫饲料添加剂方面的应用。
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