[发明专利]纳米金修饰的石墨烯用于蛋白质N末端分离的方法

权利要求书

1.一种纳米金修饰的石墨烯用于蛋白质N末端分离的方法，其特征在于，具体步骤为：

首先，合成纳米金修饰的石墨烯；

然后，对蛋白上的所有游离氨基进行封闭，再对封闭蛋白进行溶液酶解；

然后，用特劳特试剂对非N末端肽段进行巯基衍生，加入纳米金修饰的石墨烯对含巯基的非N末端肽段进行分离富集；

最后，利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行蛋白质N末端的检测；

所述的合成纳米金修饰的石墨烯的具体步骤如下：

（1）取一定质量石墨烯分散在10 mM Tris-HCl中，再加入4-10重量的多巴胺，室温下搅拌4-12 h；

（2） 将多巴胺包覆的石墨烯经离心后，用水和乙醇交替洗涤数次，再在真空下烘干4-16 h；

（3）取一定质量多巴胺包覆的石墨烯分散在50-100 ml 水中，加入终浓度为0.1-0.5mM无水合氯金酸，加热至85-90℃后，加入5-10 mM柠檬酸三钠，保持加热1小时以上，经离心，用水和乙醇交替洗涤数次后，用真空干燥，得到纳米金修饰的石墨烯；

所述的对蛋白上的所有游离氨基进行封闭，再对封闭蛋白进行溶液酶解的具体步骤如下；

（1）将蛋白溶于高浓度盐酸胍中，用等体积40-100 mM 三乙胺碳酸氢盐稀释后，5-8 mM二硫苏糖醇，60℃以上反应至少0.5小时后，再加入二硫苏糖醇2-2.5倍浓度的碘乙酰胺，闭光反应0.5-1小时，再加入20-60 mM 甲醛和10-30 mM 氰基硼氢化钠反应4-16小时；

（2）用pH 7.2-8.5的三乙胺碳酸氢盐对蛋白进行溶液置换，并重复2次以上置换动作，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的加入量为蛋白的2.5%-5%，进行过夜酶解；

所述的用特劳特试剂对非N末端肽段进行巯基衍生，加入纳米金修饰的石墨烯对含巯基的非N末端肽段进行分离富集的具体步骤为；

（1）取一单位质量蛋白酶解液加入0.2-20倍单位质量特劳特试剂, 20-60℃下反应0.5小时以上或过夜；

（2）在上述混合液中加入200-400倍质量的纳米金修饰的石墨烯，20-60℃下反应1.5 -2.5 h，取上清液，用于供基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行分析鉴定。