[发明专利]一种抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的制备方法

权利要求书

1.一种抑菌的类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)发酵液提取物的制备方法，其特征在于，其包括下述步骤：在牛乳中发酵多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CGMCCNo.10062，收集发酵液的上清液即得。

2.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述牛乳为选自全脂牛乳和/或脱脂牛乳。

3.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述牛乳的固形物含量为2-15％，所述百分比为所述固形物的质量占所述牛乳的体积的质量体积百分比。

4.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述发酵的温度为25-35℃；和/或，所述发酵的时间为1-7天；和/或，所述发酵为振荡培养。

5.如权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述振荡培养的转速为180转/分钟。

6.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述收集发酵液的上清液包括以下步骤：将所述发酵液中的多粘类芽孢杆菌CGMCC No.10062灭活、离心，收集上清液。

7.如权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述灭活为在50-80℃下水浴5-15min、冷却。

8.如权利要求7所述制备方法，其特征在于，所述冷却为冷却至室温。

9.如权利要求6-8任一项所述制备方法，其特征在于，所述离心为9000r/min离心25min。

10.如权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤：向所述上清液中加入盐进行沉淀、离心，收集沉淀物。

11.如权利要求10所述制备方法，其特征在于，所述盐为硫酸铵。

12.如权利要求10所述制备方法，其特征在于，所述沉淀的时间为4-24小时。

13.如权利要求10-12任一项所述制备方法，其特征在于，所述盐的终饱和度为40-90％，所述百分比为所述盐的质量占所述上清液和盐的总体积的质量体积百分比。

14.如权利要求10所述制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤：纯化所述沉淀物，所述纯化在所述收集沉淀物后进行。

15.如权利要求14所述制备方法，其特征在于，所述纯化包括以下步骤：重悬所述沉淀物、透析、过凝胶过滤层析。

16.如权利要求15所述制备方法，其特征在于，所述重悬为使用超纯水重悬；和/或，所述透析的透析袋的截留分子量为3500道尔顿和1000道尔顿；和/或，所述凝胶过滤层析柱的筛选分子量范围为100道尔顿-1500道尔顿。

17.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物包括分子量在25千道尔顿-37千道尔顿之间的和小于10千道尔顿的蛋白质；和/或，所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物抑制革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌；和/或，所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的抑菌活性不受温度的影响；和/或，不受pH值的影响；和/或，受胃蛋白酶或蛋白酶K影响，不受脂肪酶或胰蛋白酶影响。