[发明专利]一种莲藕茎尖组织初代培养方法

权利要求书

1.一种莲藕茎尖组织初代培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)莲藕芽体的采集：采集时间为5-8月，选取地下茎的顶芽；

2)芽体的前处理：将顶芽留取顶部3-5cm，用消毒液处理及流水清洗；

3)消毒与接种：

所述接种方法为：

a.外植体的摘取：在解剖镜下由外向内依次剥除生长点外围包裹的叶片，直到生长点暴露；

b.用解剖针针尖挑取生长点上部组织，接种到莲藕膨大培养基中；所述培养基的组成是：1/2MS+NAA(0.1-0.3mg/L)+BA(0.2-0.5mg/L)+蔗糖(3％)，pH为5.8-6.0；

4)茎尖组织膨大培养：接种后进行震荡培养，振速为2rmp，培养条件温度23-25℃，光强2000-3000lx，光照时间为16hr；培养周期30-40d形成膨大的芽体；

5)展叶培养：茎尖组织在膨大培养基培养30-40d后，将培养基更换成展叶培养基，培养基的组成是MS+BA(0.1-0.3mg/L)+GA(0.2-0.5mg/L)+蔗糖(5％)，pH为5.8-6.0；培养条件温度23-25℃，光强2000-3000lx，光照时间为16hr，培养周期40-50天。

2.根据权利要求1中所述的莲藕茎尖组织初代培养方法，其特征在于，步骤1)中，为了保证品种的纯度，芽体采集要在品种园中进行，采集长度为5-10cm，以确保匍匐茎的质量。

3.根据权利要求1中所述的莲藕茎尖组织初代培养方法，其特征在于，步骤2)中从头部剪取匍匐茎3-5cm的原因是便于消毒接种时操作方便。

4.根据权利要求1中所述的莲藕茎尖组织初代培养方法，其特征在于，步骤2)中的消毒液处理及流水清洗是用400倍84消毒液浸泡芽体10-15分钟，再用蒸馏水冲洗10-15分钟，所述400倍是指用水按400：1的体积比稀释84消毒液。

5.根据权利要求1所述的莲藕茎尖组织初代培养方法，其特征在于，步骤3)中消毒方法为：

a.用75％的酒精消毒30秒；

b.有效氯浓度为1％的次氯酸钠溶液，消毒30分钟；

c.灭菌水清洗后，备用。

6.根据权利要求1所述的莲藕茎尖组织初代培养方法，其特征在于，步骤3)中所述解剖镜的放大倍数为10-40x，以便于清晰观察生长点，方便取样。

7.根据权利要求1所述的莲藕茎尖组织初代培养方法，其特征在于，步骤3)中，为保证外植体大小﹤0.5mm，所述解剖针针粗度为Φ＝0.2-0.4mm，操作时以此为对比，针尖所取生长点组织不超过针的粗度。

8.根据权利要求1中所述的莲藕茎尖组织初代培养方法，其特征在于，步骤3)中消毒和接种均在超净工作台内进行。

9.根据权利要求1所述的莲藕茎尖组织初代培养方法，其特征在于，步骤4)中培养容器为直径为25mm的试管，培养基用量为15-20ml。

10.根据权利要求1所述的莲藕茎尖组织初代培养方法，其特征在于，步骤5)中培养容器为300ml三角瓶，培养基用量100ml。