[发明专利]鸟胞内分枝杆菌复合群检测用引物和探针、以及其检测方法

权利要求书

1.用于检测鸟胞内分枝杆菌复合群的引物，其特征在于，包括用于检测鸟分枝杆菌的上游引物和下游引物，其核苷酸序列分别为序列表中的SEQIDNO.1和SEQIDNO.2；以及用于检测胞内分枝杆菌的上游引物和下游引物，其核苷酸序列分别为序列表中的SEQIDNO.3和SEQIDNO.4。

2.权利要求1所述引物的衍生序列。

3.根据权利要求2所述的衍生序列，其特征在于：所述衍生序列是在SEQIDNO.1和/或SEQIDNO.2，以及SEQIDNO.3和/或SEQIDNO.4的基础上经过一至十个碱基的取代、缺失或添加得到的引物序列。

4.用于检测鸟胞内分枝杆菌复合群的Taqman探针，其特征在于，包括具有序列表中SEQIDNO.5和SEQIDNO.6的两个Taqman探针；两个所述探针的5’端标记有报告荧光基团，3’端标记有淬灭荧光基团。

5.根据权利要求4所述的用于检测鸟胞内分枝杆菌复合群的Taqman探针，其特征在于，所述具有序列表中SEQIDNO.5的探针的5’端标记JOE，3’端标记BHQ；所述具有序列表中SEQIDNO.6的探针的5’端标记FAM，3’端标记BHQ。

6.根据权利要求5所述Taqman探针的衍生序列。

7.根据权利要求6所述的，其特征在于，所述衍生序列是在SEQIDNO.5和/或SEQIDNO.6的基础上，在序列的5’端和/或3’端添加一个或多个碱基得到的序列。

8.一种鸟胞内分枝杆菌复合群检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的用于检测鸟胞内分枝杆菌复合群的引物和权利要求4所述的用于检测鸟胞内分枝杆菌复合群的Taqman探针。

9.一种检测鸟胞内分枝杆菌复合群的方法，其特征在于，采用权利要求1所述的用于检测鸟胞内分枝杆菌复合群的引物和权利要求4所述的用于检测鸟胞内分枝杆菌复合群的Taqman探针，以待检测样本基因组DNA为模板，进行荧光定量PCR，其步骤如下：

1)提取待检测样本基因组DNA；

2)配置荧光定量PCR反应体系：模板5μl，10×Taq酶buffer5μl，2.5mMdNTP4μl，用于检测鸟分枝杆菌的上游引物和下游引物各2μl，其浓度均为10μM，用于检测胞内分枝杆菌的上游引物和下游引物各2μl，浓度为10μM，序列表中SEQIDNO.5和SEQIDNO.6的两个Taqman探针各1μl，浓度均为10μM，Taq酶2.5U，UNG酶0.01μl，ddH2O补至50μl；

3)进行PCR反应：反应条件为：50℃2min；94℃5min；94℃30s，60℃40s，共40个循环；在荧光定量PCR仪上进行扩增，收集信号。