[发明专利]基于凝血酶与显色基质相互作用的抗凝血酶III快速检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种基于凝血酶与显色基质相互作用的抗凝血酶III快速检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂、终止液和显色测定卡，所述R1试剂包含肝素、凝血酶，所述R2试剂包含发色底物试剂，所述显色测定卡上有比色参考带和反应池，所述比色参考带上分为由深至浅的6个黄色区域，从深至浅分别对应抗凝血酶III的活性20%、40%、60%、80%、100%和＞100%。

2.根据权利要求1所述的抗凝血酶III快速检测试剂盒，其特征在于，所述发色底物试剂的各组分配比为：发色底物Su60.25mg/ml、Tris-HCl50mM、pH84、吐温-201wt%、PEG80001wt%、海藻糖3.5wt%和叠氮钠0.01wt%。

3.根据权利要求1所述的抗凝血酶III快速检测试剂盒，其特征在于，所述比色参考带通过如下方法获得：将抗凝血酶III标准品用生理盐水稀释成一系列已知浓度的样本，分别采用所述检测试剂盒进行检测，检测结果为各反应池内显示的不同颜色的反应液，将不同颜色的反应液使用数码相机拍照成图并用图像处理软件分析，标识出图片在RGB模式下的R值、G值和B值，将所述R值、G值和B值用绘图软件整合并绘制得到反应液颜色与抗凝血酶III的活性相对应的比色参考带。

4.根据权利要求3所述的抗凝血酶III快速检测试剂盒，其特征在于，所述R值和G值均为255，所述B值与抗凝血酶III活性呈现良好的线性关系，线性关系用函数定义为：Y=

-0.318X+99.93，R²=0.999。

5.根据权利要求1所述的抗凝血酶III快速检测试剂盒，其特征在于，所述反应池采用梯形结构设计。

6.根据权利要求1所述的抗凝血酶III快速检测试剂盒，其特征在于，所述显色测定卡采用PVC、PP、PE、LDPE或ABS材质制备得到。

7.根据权利要求1所述的抗凝血酶III快速检测试剂盒，其特征在于，所述终止液的配方为：醋酸50wt%，叠氮钠0.01wt%。

8.根据权利要求1所述的抗凝血酶III快速检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂的配方

为：凝血酶5000IU/L、肝素3000IU/L、Tris-甘氨酸50mM，pH8.4、氯化钠175mM、甘露醇5wt%、Na₂EDTA0.2wt%、BSA2wt%和叠氮钠0.1wt%。

9.权利要求1~8任一所述基于凝血酶与显色基质相互作用的抗凝血酶III快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）含抗凝剂的样本血浆或样本血清加入到反应池中；

（2）向反应池中加入R1试剂，混匀，使过量的凝血酶与抗凝血酶III充分反应；

（3）再加入R2试剂，混匀，使剩余的凝血酶与发色底物试剂充分反应；

（4）最后加入终止液，终止反应；将反应池中反应液的颜色与比色参考带进行对比，根据反应液颜色与比色参考带上6个区域颜色的接近程度，判断抗凝血酶III的活性。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述样本血浆或样本血清：R1试剂：R2试剂：终止液的体积比为1：3：1：0.5，步骤（2）所述过量的凝血酶与抗凝血酶III充分反应的反应时间为1分钟；步骤（3）所述剩余的凝血酶与发色底物试剂充分反应的反应时间为3分钟。