[发明专利]基于凝血酶与显色基质相互作用的抗凝血酶III快速检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药体外诊断试剂领域，具体涉及一种基于凝血酶与显色基质相互作用的抗凝血酶III快速检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

发色底物法检测的原理为：人工合成一种可以被待测凝血活酶催化裂解的化合物，此化合物连接上一种显色基质，在检测过程中产色物质可被解离下来，使被检样品中出现颜色变化，根据颜色变化可推算出被检凝血活酶的活性。产色物质一般选用连接对硝基苯胺(pNA)。

目前该方法常用于生化分析仪和分光光度计等设备上，游离的pNA呈黄色，其测定波长一般选用405nm。在这一波长下，其它物质对光的吸收小于pNA对光吸收的1％。具体检测方法既可采用动态法、也可采用终点法。动态法即是连续记录样品的吸光度变化，算出单位时间吸光度的变化量，并以每分钟吸光度的变化来报告结果。终点法即是指在活性酶同产色物质作用一段时间后，加入乙酸终止反应，检测此段时间内吸光度的变化，进而推算出待检酶的活性。

使用产色物质在检测血栓/止血指标时大致可分成三种模式。

(1)酶的检测：即在含酶的样品中直接加入产色物质，因为酶可裂解产色物质释放pNA，监测由于pNA释放而导致被检样品在405nm处光吸收的变化，就可推算样品中酶的活性。如对凝血酶、纤溶酶等的检测。

(2)对酶原的检测：要对某种酶原进行测定，必须先用激活剂将其激活，使其活化位点暴露，才可将产色物质上的pNA裂解下来。加入的激活剂必须过量，因为只有这样才能使酶原被全部激活，酶原的量才会同样品中酶的活性成一定的数量关系。样品中酶的活性可通过pNA释放，即样品吸光度的变化反应出来，由此则可推算出样品中酶原的含量。

(3)酶抑制物的检测：首先往待检样品中加入过量对应的酶中和该抑制物，剩余的酶可裂解产色物质释放pNA，监测由于pNA释放而导致光吸收的变化，就可测出酶的活性，进而可推算出样品中抑制物的含量。如对抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)等。

现在的诊断技术正在向大型集成化和简单快速化两个方向发展，显色底物法在体外诊断行业，尤其是血栓与止血领域应用十分广泛，且检测结果的准确性良好，但是现有的显色底物法的测试必须使用配套的仪器才能实现检测。然而在很多时候，如条件不允许的情况下(没有仪器或仪器没有这项功能的时候)就不能开展该方面的检测项目。当只需要简单快速的判断大致含量或者只需定性判断阴阳性的时候，现有的显色底物法的检测方法就比较欠缺。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种基于凝血酶与显色基质相互作用的抗凝血酶III快速检测试剂盒及其检测方法。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种基于凝血酶与显色基质相互作用的抗凝血酶III快速检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂、终止液和显色测定卡，所述R1试剂包含肝素、凝血酶，所述R2试剂包含发色底物试剂，所述显色测定卡上有比色参考带和反应池，所述比色参考带上分为由深至浅的6个黄色区域，从深至浅分别对应抗凝血酶III的活性20％、40％、60％、80％、100％、＞100％。

上述方案中，所述发色底物试剂各组分的配比为：发色底物Su60.25mg/ml、Tris-HCl50mM、pH8.4、吐温-201wt％、PEG80001wt％、海藻糖3.5wt％和叠氮钠0.01wt％。

上述方案中，所述比色参考带通过如下方法获得：将抗凝血酶III标准品用生理盐水稀释成一系列已知浓度的样本，分别采用所述检测试剂盒进行检测，检测结果为各反应池内显示的不同颜色的反应液，将检测结果使用数码相机拍照成图并用图像处理软件分析，标识出图片在RGB模式下的R值、G值和B值，将所述R值、G值和B值用绘图软件整合并绘制得到反应液颜色与抗凝血酶III的活性相对应的比色参考带。

上述方案中，所述R值和G值均为255，所述B值与抗凝血酶III的活性呈现良好的线性关系，线性关系用函数定义为：Y＝-0.318X+99.93，R²＝0.999。

上述方案中，所述反应池采用梯形结构设计。

上述方案中，所述显色测定卡采用PVC、PP、PE、LDPE或ABS材质制备得到，其中，更为优选地，采用白色的PVC材质制备得到。

上述方案中，所述终止液的配方为：醋酸50wt％，叠氮钠0.01wt％。