[发明专利]一种愈伤灵胶囊的指纹图谱检测方法和标准指纹图谱在审
申请号: | 201510809727.9 | 申请日: | 2015-11-23 |
公开(公告)号: | CN105353050A | 公开(公告)日: | 2016-02-24 |
发明(设计)人: | 刘令安;杨华;郭元满;谭泽云;易小兰;谢金华 | 申请(专利权)人: | 湖南汉森制药股份有限公司 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 410000 湖*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 愈伤灵 胶囊 指纹 图谱 检测 方法 标准 | ||
1.愈伤灵胶囊的指纹图谱检测方法,其特征在于采用高效液相色谱法,具体包括如下步骤:
(a)对照品溶液的制备:称取人参皂苷Rg1对照品,置于20~50ml容量瓶中,加50%~100%甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,制成对照品溶液;
(b)供试品溶液的制备:取愈伤灵胶囊内容物,加80%~100%甲醇50~100ml,称重,回流提取2~4h,放冷,再称定重量,用同种溶剂补重,摇匀,用微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液;
(c)色谱条件:色谱柱为C18反相色谱柱;采用梯度洗脱,流动相为流动相A与流动相B组成的梯度洗脱液,流动相A为乙腈,流动相B为0.1~0.2%磷酸溶液;检测波长初始为244nm,18min时切换波长为200nm;柱温25℃~30℃;流速0.8ml/min~1.2ml/min;分析时间65min;
(d)测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到指纹图谱。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述的愈伤灵胶囊主要由下述重量份数的原药材制得:土鳖虫60份、红花120份、自然铜(煅)30份、黄瓜子(炒)120份、冰片12份、续断60份、三七180份、当归90份、落新妇提取物50.4份。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于:所述的愈伤灵胶囊为由下述方法制得的愈伤灵胶囊:以上九味,除冰片、落新妇提取物外,其余红花等七味粉碎成细粉,按现有常规方法制成胶囊剂。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述的愈伤灵胶囊供试品溶液制备中,称取内容物0.5~2g,回流提取2~4h。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于:流动相B为0.1~0.2%磷酸溶液,优选的为0.1%磷酸溶液,洗脱梯度如表所示。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于:检测波长初始为244nm,18min时切换波长为200nm。
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于:总流速为0.8~1.2ml/min,优选的为1.0ml/min。
8.如权利要求1所述的方法,其特征在于:柱温为25℃~35℃。
9.如权利要求1所述的方法,其特征在于:精密吸取注入高效液相色谱仪的对照品溶液与供试品溶液的进样量为10μl。
10.如权利要求1所述的方法,其特征在于:依据所得的10批愈伤灵胶囊的指纹图谱,制定标准指纹图谱;其中所述标准指纹图谱具有15个共有峰,其中4号峰为绿原酸,5号峰为羟基红花黄色素A,7号峰为人参皂苷Rg1,9号峰为人参皂苷Rb1,10号峰为藁本内酯。
11.如权利要求1或10所述的方法,其特征在于:愈伤灵胶囊指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比对,其相似度为0.891~1.000,共有峰有15个,共有峰峰面积总和占总峰面积的90%以上,以7号峰人参皂苷Rg1为参照峰,计算相对保留时间和相对峰面积,各峰的相对保留时间分别为:(1)0.118~0.125、(2)0.241~0.250、(3)0.257~0.293、(4)0.345~0.380、(5)0.431~0.462、(6)0.481~0.524、(S)1.000、(8)1.100~1.214、(9)1.022~1.150、(10)1.302~1.508、(11)1.402~1.589、(12)1.501~1.708、(13)1.587~1.724、(14)1.714~1.901、(15)2.001~2.189;各峰的相对峰面积分别为:(1)0.231~0.501、(2)0.168~0.455、(3)0.722~1.121、(4)0.042~0.230、(5)0.260~0.507、(6)0.093~0.192、(S)1.000、(8)0.479~0.711、(9)0.527~0.580、(10)0.255~0.569、(11)1.081~3.705、(12)0.625~2.705、(13)0.107~0.557、(14)2.719~7.105、(15)0.481~0.861。
12.优选的各峰的相对保留时间分别为:(1)0.121~0.123、(2)0.245~0.248、(3)0.282~0.290、(4)0.359~0.369、(5)0.444~0.458、(6)0.493~0.504、(S)1.000、(8)1.118~1.185、(9)1.098~1.140、(10)1.382~1.480、(11)1.496~1.506、(12)1.602~1.661、(13)1.664~1.687、(14)1.825~1.868、(15)2.094~2.107;优选的各峰的相对峰面积分别为:(1)0.243~0.585、(2)0.184~0.268、(3)0.837~1.032、(4)0.102~0.197、(5)0.321~0.477、(6)0.128~0.171、(S)1.000、(8)0.509~0.647、(9)0.559~0.578、(10)0.341~0.500、(11)1.274~2.005、(12)0.713~2.121、(13)0.217~0.439、(14)2.936~6.003、(15)0.519~0.830。
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