[发明专利]一种愈伤灵胶囊的指纹图谱检测方法和标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明属于药物质量控制技术领域，特别涉及一种愈伤灵胶囊的指纹图谱检测方法，并由此得到其标准指纹图谱。

背景技术

愈伤灵胶囊由土鳖虫、红花、自然铜（煅）、黄瓜子（炒）、冰片、续断、三七、当归、落新妇提取物九味药材组成。该方具有活血散瘀，消肿止痛之功效，主要用于治疗跌打挫伤、筋骨瘀血肿痛。愈伤灵处方来源于《部颁标准》中药成方制剂第八册。

愈伤灵胶囊作为中成药，其药效是多种活性成分共同作用的结果。但目前愈伤灵胶囊的现行质量标准仅有鉴别项，无含量测定项，无法对其质量进行有效监控。针对愈伤灵胶囊的质量检测方法的公开专利只有一个，中国专利200710176059.6（公开号CN101153864A），仅采用HPLC法控制其岩白菜素的含量。针对愈伤灵胶囊的质量检测方法如下，《中国医药》2012年5月第7卷增刊《高效液相色谱法测定愈伤灵胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量》、《中成药》2006年2月第28卷第2期《愈伤灵胶囊质量标准研究》、《医药导报》2006年10月第25卷第10期《愈伤灵胶囊的质量控制》等文章中记载了一种测定愈伤灵胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1的含量的HPLC方法；《安徽医药》2009年《HPLC法测定愈伤灵胶囊中岩白菜素的含量》记载了一种测定愈伤灵胶囊中岩白菜素含量的HPLC方法；《中华中医药学会第七次中药分析学术交流会论文集》收录的《愈伤灵胶囊的特征图谱研究及多指标成分的含量测定》中记载了一种愈伤灵胶囊的特征图谱及多指标成分测定方法。现有技术中，仅有一篇文献报道了愈伤灵胶囊的指纹图谱方法，其监控了红花、三七、当归、续断、落新妇五味药材，本方法则监控了土鳖虫、红花、三七、当归、续断、落新妇六味药材，较其多监控了一味药材（土鳖虫），且土鳖虫具有破血逐瘀、续筋接骨之功效，主要用于跌打损伤、筋伤骨折、血瘀经闭、产后瘀阻腹痛、瘾瘕痞块等症的治疗，是愈伤灵胶囊发挥其功效的关键药材，故控制其质量有较大意义。此外，文献中采用的方法为UPLC法，本专利方法为HPLC法，后者适用范围更广，更有利于企业对愈伤灵胶囊的质量进行全面控制并节约企业的检测成本。因此，建立愈伤灵胶囊的指纹图谱检测方法和标准指纹图谱具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的是针对愈伤灵胶囊的质量控制现状，提供一种基于高效液相色谱法的愈伤灵胶囊的指纹图谱检测方法及根据该方法建立得到的愈伤灵胶囊的高效液相色谱指纹图谱，有利于对其原料药材、中间体及其终产品质量的有效控制以保证其临床疗效。

本发明的愈伤灵胶囊的指纹图谱检测方法，包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备：

称取人参皂苷Rg1对照品，置于20~50ml容量瓶中，加50%~100%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备：

取愈伤灵胶囊内容物，加80%~100%甲醇50~100ml，称重，回流提取2~4h，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

（3）色谱条件：

色谱柱为C₁₈反相色谱柱；采用梯度洗脱，流动相为流动相A与流动相B组成的梯度洗脱液，流动相A为乙腈，流动相B为0.1~0.2%磷酸溶液；检测波长初始为244nm，18min时切换波长为200nm；柱温25℃~30℃；流速0.8ml/min~1.2ml/min；分析时间65min；

（4）测定：

精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

本发明中，所述的愈伤灵中药方为现有中药方，其包括土鳖虫、红花、自然铜（煅）、黄瓜子（炒）、冰片、续断、三七、当归、落新妇提取物九味药材，各药材的重量份数比一般为：60:120:30:120:120:60:180:90:50.4。上述愈伤灵胶囊可由下述方法制得：以上九味，除冰片、落新妇提取物外，其余红花等七味粉碎成细粉，按现有常规方法制成胶囊剂。

本发明中，所述的供试品制备方法中，供试品的称样量为0.5~2g，回流提取时间为2~4h，优选的提取时间为3h。

本发明中，所述的流动相B为0.1~0.2%磷酸溶液，优选的为0.1%磷酸溶液，洗脱梯度如表1所示。

表1。

本发明中，所述的检测波长初始为244nm，18min时切换波长为200nm。