[发明专利]一种用于同时检测绵羊和山羊六种病毒的多重PCR试剂盒有效
申请号: | 201510810268.6 | 申请日: | 2015-11-19 |
公开(公告)号: | CN105331742B | 公开(公告)日: | 2019-04-05 |
发明(设计)人: | 付明哲;许信刚;何亚鹏;张琪;鲍长磊 | 申请(专利权)人: | 西北农林科技大学 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/686 |
代理公司: | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人: | 董芙蓉 |
地址: | 712100 陕西省咸*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 同时 检测 绵羊 山羊 病毒 多重 pcr 试剂盒 | ||
1.一种用于同时检测绵羊和山羊携带的六种病毒的多重PCR试剂盒,其特征在于,所述多重PCR试剂盒包括六对特异性引物,其中,用于蓝舌病病毒检测的引物分别为BTV-F和BTV-R,引物序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2;用于口蹄疫病毒检测的引物分别为FMDV-F和FMDV-R,引物序列分别为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4;用于小反刍兽疫病毒检测的引物分别为PPRV-F和PPRV-R,引物序列分别为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6;用于绵羊痘病毒检测的引物分别为SPPV-F和SPPV-R,引物序列分别为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8;用于山羊痘病毒检测的引物分别为GTPV-F和GTPV-R,引物序列分别为SEQ ID NO:9和SEQ IDNO:10;用于羊口疮病毒检测的引物分别为ORFV-F和ORFV-R,引物序列分别为SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12;
所述多重PCR试剂盒还包括阳性对照、阴性对照、反转录液、PCR混合液、去离子水;
所述BTV-F、BTV-R、FMDV-F、FMDV-R、PPRV-F、PPRV-R、SPPV-F、SPPV-R、GTPV-F、GTPV-R、ORFV-F、ORFV-R的摩尔比分别为2:2:2:2:2:2:2:2:3:3:1:1;
所述BTV-F和BTV-R、FMDV-F和FMDV-R、PPRV-F和PPRV-R、SPPV-F和SPPV-R、GTPV-F和GTPV-R、ORFV-F和ORFV-R六对引物在多重PCR的扩增的退火温度为55℃;
所述引物BTV-F和BTV-R、FMDV-F和FMDV-R、PPRV-F和PPRV-R、SPPV-F和SPPV-R、GTPV-F和GTPV-R、ORFV-F和ORFV-R在多重PCR反应体系中的终浓度分别为1.0pmol/μL、1.0pmol/μL、1.0pmol/μL、1.0pmol/μL、1.5pmol/μL、0.5pmol/μL。
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