[发明专利]一种用于同时检测绵羊和山羊六种病毒的多重PCR试剂盒

说明书

一种用于同时检测绵羊和山羊携带的六种病毒的多重PCR试剂盒，包括六对特异性引物，其中，用于蓝舌病病毒检测的引物分别为BTV‑F和BTV‑R；用于口蹄疫病毒检测的引物分别为FMDV‑F和FMDV‑R；用于小反刍兽疫病毒检测的引物分别为PPRV‑F和PPRV‑R；用于绵羊痘病毒检测的引物分别为SPPV‑F和SPPV‑R；用于山羊痘病毒检测的引物分别为GTPV‑F和GTPV‑R；用于羊口疮病毒检测的引物分别为ORFV‑F和ORFV‑R；引物序列分别为SEQ ID NO:1～12的核苷酸序列。本发明能同时检测绵羊和山羊临床样品中蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、绵羊痘病毒、山羊痘病毒和羊口疮病毒六种病毒核酸，且具有敏感性强、特异性高、操作简单、节约检测时间的特点。

技术领域

本发明涉及一种用于同时检测绵羊和山羊携带的六种病毒的多重PCR试剂盒，具体涉及一种同时检测绵羊和山羊蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、绵羊痘病毒、山羊痘病毒和羊口疮病毒的多重PCR检测试剂盒。

背景技术

多重PCR(multiplex PCR)是在普通PCR的基础上加以改进，于一个PCR反应体系中加入多对特异性引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域扩增多个目的片段的PCR技术。多重PCR主要用于多种病原微生物的同时检测或鉴定和病原微生物、某些遗传病及癌基因的分型鉴定，其特点有：高效性，在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物，或对有多个型别的目的基因进行分型；系统性，多重PCR很适宜于成组病原体的检测；经济简便性，多种病原体在同一反应管内同时检出，将大大的节省时间，节省试剂，节约经费开支，为临床提供更多更准确的诊断信息。

蓝舌病(Bluetongue，BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起的通过吸血昆虫-库蠓叮咬传播，感染牛羊等反刍动物的一种非接触性传染病，全球已知至少有24个不同血清型的BTV，不同血清型对牛羊的致病性不同，且型间不能产生交叉保护。蓝舌病主要感染反刍动物牛、羊，表现为高烧、黏膜水肿和糜烂等症状，致死率为20％～30％。该病发病率高，传播迅速，而又极难防制，被国际兽医局列为A类传染病。

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的动物急性、烈性传染病，主要危害牛、羊等偶蹄动物，易感动物的发病率几乎为100％。该病主要特点是流行广、传播快、发病率高，被国际兽疫局列为A类传染病之首，对畜牧业生产危害性极大，是世界各国检测和防疫的重点对象。

小反刍兽疫(PPR)又称羊瘟，是由小反刍兽疫病毒引起的山羊、绵羊等小反刍动物的一种急性、高度接触性传染病，牛感染但不发病。PPR对动物的致死率高达50％～90％，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病，我国将其列为一类动物疾病，该病分布于非洲、亚洲等地，在全球呈现由西向东扩散趋势。

绵羊痘是由痘病毒科(Poxciridae)脊椎动物痘病毒亚科(Chordopoxvirdae)羊痘病毒属(Capripox virus)的绵羊痘病毒(Sheeppox virus,SPPV)引起绵羊的一种急性、热性、接触性传染病。主要表现为发热、无毛或少毛部位皮肤黏膜发生丘疹和疱疹，有较高的死亡率。羊痘在非洲中北部、亚洲中部和西南部以及印度大部分地区呈地方性流行，对养羊业造成严重的危害和巨大经济损失。因而，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病，在我国也被列为一类传染病。

山羊痘(Goat pox disease)是由痘病毒科(Poxciridae)脊椎动物痘病毒亚科(Chordopoxvirdae)羊痘病毒属(Capripox virus)的山羊痘病毒(Goat poxvirus,GTPV)引起山羊及绵羊的一种急性热性高度接触性传染病，绵羊痘和山羊痘统称羊痘，羊痘能导致病羊消瘦，产乳量大幅度降低，严重时导致死亡，造成严重的经济损失。因而羊痘被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病，我国将其列为一类动物疾病。