[发明专利]水牛特异性引物、试剂盒及其在水牛源性成分鉴定中的应用

说明书

本发明提供了一种水牛特异性引物、试剂盒及其在水牛源性成分鉴定中的应用，属于动物种源性成分分子检测技术领域。本发明中，水牛特异性引物是能特异扩增SEQ ID No.1所示的核苷酸序列或该序列的特异性片段的引物对SEQ ID No.2&3。本发明试剂盒包括所述水牛特异性引物、反应试剂以及阳性和空白对照。采用本发明的引物扩增样品DNA，对PCR扩增产物进行分析，可判定样品中是否含有水牛源性成分。本发明为肉制品、皮张和饲料中水牛源性成分的检测提供了有效、精准、可靠的手段，具有简便、快速、全面、特异性强的特点，且成本较低，适用性广。

技术领域

本发明涉及动物分子生物学领域，具体涉及水牛特异性引物、试剂盒及其在水牛源性成分鉴定中的应用。

背景技术

随着人民生活水平的提高，肉品消费量的增加，市场上也出现了各种肉制品掺假的现象。在肉品的进出口贸易中，由于我国对肉品质质量的检验方法较为落后，错检、漏检现象时有发生。以次充好，掺杂掺假严重影响了公平交易、食品安全，甚至涉及到宗教信仰问题。因此肉制品来源的安全性成为消费者关心的焦点问题之一，而对肉制品的来源进行鉴定并建立便捷的检测方法是解决这一问题的关键。

现有技术中对于肉源食品的鉴定主要包括蛋白质分析法，例如电泳法、免疫法等技术，这对于生肉的鉴别具有一定可行性，但特异性差、准确率低。国内已发表的针对水牛属特异性的检测方法，是通过大量的测序工作和比对分析，获得属间物种特异性基因位点，由此设计特异性引物并用于物种鉴别。然而针对该目标序列设计的特异性引物仅可用于水牛、黄牛与牦牛的鉴别，而对其他物种是否也适用并未做研究。因此，如何有效、准确地判别出肉制品是否属于水牛肉，并建立一种简单易行的检测方法具有紧迫性。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术不足，提供一种可用于水牛源性制品特异性检测的引物；

本发明的第二个目的在于提供用于水牛源性制品检测的检测试剂盒；

本发明的目的还在于提供水牛源性成分的鉴定方法。

为实现上述目的，本发明从种内一致性和稳定性、种间特异性、拷贝数等方面进行水牛基因组特异DNA序列的筛选，经过普通牛、羊(绵羊、山羊)、猪、马、驴、鼠(大鼠、小鼠、仓鼠)、豚鼠、鸡、鸭、鹅、兔、狗、狐、水貂和貉子的基因组DNA及不同的水牛品种DNA中的检测，筛选在水牛中特异的、在其他物种中不存在或同源性低的DNA片段作为检测分子。经过大量分析和实验工作，最终获得可供检测使用的特异DNA序列，其核苷酸序列如序列表SEQ IDNo.1所示。

基于此，本发明首先提供一种水牛特异性引物，其能特异性扩增SEQ ID No.1所示的核苷酸序列或该序列的特异性片段。

优选地，引物长度为18～27bp。引物的设计需要考虑是否容易发生错配、扩增片段长度、反应温度等多方面。

优选地，该引物序列如下：

BUBALUS-F：5′-GAAGAAGAGGGAGGGGTAGACAA-3′

BUBALUS-R：5′-CAGAACTAGTGAAGGCGGCA-3′；

或该引物向5′、3′端延伸或修饰得到的仍能特异性扩增SEQ ID No.1所示序列的引物。

进一步，本发明提供含有上述特异性引物的检测试剂盒。

优选地，所述试剂盒还包括下述试剂中的一种或多种：Taq酶、dNTPs、MgCl₂、PCR缓冲液、阳性对照DNA模板、双蒸水；或者还包括下述试剂中的一种或多种：Taq DNAMasterMix、阳性对照DNA模板、双蒸水。

所述阳性对照DNA模板为牛科水牛属的水牛基因组DNA模板；