[发明专利]一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法

权利要求书

1.一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，其特征在于用CTAB法提取DNA的接种时直接用保菌的含目的菌的细沙接种、和/或用配制的孢子悬液均匀涂板接种后再加入细沙培养、培养的菌丝在提取DNA磨样时加入细沙磨样，所有样品均需磨样至菌丝呈现丝滑状超细粉末时止；

CTAB法提取DNA的接种时用保菌的含目的菌的细沙直接接种包括以下步骤：

1)在SDAY平板上铺上一层灭菌后的玻璃纸，加入100-200 µL的0.02%吐温水，再用含保有目的菌的60-120目细沙0.1-0.4g接种至SDAY玻璃纸上用涂棒均匀涂板， 24-26ºC培养2-3天；

2）然后刮取玻璃纸上的菌丝放入-70℃冰箱预冷的研钵中，加液氮进行快速研磨2-8min至菌丝最终呈现丝滑状超细粉末时止，再按照CTAB法步骤操作，提取过程减少在空气中暴露，所有离心过程使用冷冻离心机在4℃下进行；

CTAB法提取DNA的孢子悬液涂板后添加细沙方式接种包括以下步骤：

1）用灭菌后的0.02%吐温水配制成1×10⁷个/ml的孢子悬液，取100-200 µL悬液用涂棒均匀涂板接种于SDAY平板表面的玻璃纸上，再添加60-120目灭菌后的细沙0.1-0.4 g至接种的平板上，然后24-26℃培养2-3天；

2）然后刮取玻璃纸上的菌丝放入-70℃冰箱预冷的研钵中，加液氮进行快速研磨2-8min至菌丝最终呈现丝滑状超细粉末时止，再按照CTAB法步骤操作，提取过程应尽量减少在空气中暴露，所有离心过程使用冷冻离心机在4℃下离心；

CTAB法用培养的菌丝在提取DNA磨样时加入细沙磨样包括以下步骤：

1)用含目的菌的细沙和/或配制成的1×10⁷个/ml的孢子悬液接种于SDAY平板表面的玻璃纸上，24-26℃培养2-3天；

2)然后刮取玻璃纸上的菌丝放入-70℃冰箱预冷的研钵中，加入60-120目的灭菌后的细沙0.1-0.4 g加液氮进行快速研磨2-8 min至菌丝最终呈现丝滑状超细粉末时止，再按照CTAB法步骤操作，提取过程减少在空气中暴露，所有离心过程使用冷冻离心机在3-5℃下离心；

所述丝滑状超细菌丝 粉末为600-1000目。

2.如权利要求1所述的一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，其特征在于CTAB法提取DNA的接种时用保菌的含目的菌的细沙直接接种的步骤1）中：加入120-180 µL的0.02%吐温水，再加入80-100目含目的菌种的细沙0.2-0.3 g至SDAY玻璃纸上用涂棒涂板均匀，25℃培养2.5天；步骤2）中：研磨时间为3-7 min。

3.如权利要求1所述的一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，其特征在于CTAB法提取DNA的孢子悬液涂板后添加细沙方式接种的步骤1）中：取120-160 µL 1×10⁷个/ml孢子悬液涂板均匀后，再添加80-100目灭菌后的细沙0.2-0.3 g至平板上，25℃培养2.5天；步骤2）中：研磨时间为3-7 min。

4.如权利要求1所述的一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，其特征在于CTAB法用培养的菌丝在提取DNA磨样时加入细沙磨样的步骤1）中：取120-180 µL孢子悬液直接用涂棒均匀涂板接种于SDAY平板表面的玻璃纸上，25℃培养2.5天；步骤2)中加入80-100目的灭菌后的细沙0.2-0.3 g加液氮进行快速研磨3-5 min至菌丝最终呈现丝滑状超细粉末时止。

5.如权利要求1所述的一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，其特征在于所述的真菌为球孢白僵菌、绿僵菌或蛹虫草。

6.如权利要求2所述的一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，其特征在于步骤2）中：研磨时间为优选为4-6 min。

7.如权利要求3所述的一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，其特征在于步骤2）中：研磨时间为4-6 min。