[发明专利]一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法

说明书

一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，属于分子生物技术领域。CTAB法提取DNA的接种选用含菌种的细沙直接接种、和/或用孢子悬液接种后再添加细沙培养、和/或培养的菌丝在提取DNA磨样时添加细沙磨样，至菌丝最终呈现丝滑状超细粉末）时止。上述一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，可以显著提高提取的DNA的含量，并且对DNA的品质及得率都有显著提高；且该方法操作方便、实验稳定性强、可重复性高、准确快捷，在满足DNA提取质量的同时，又可在磨样环节大大节省劳动强度，即使大量提取DNA样品时一样有较高的磨样速度，极大的缩短了磨样时间与人磨样的疲劳度及提取失败的概率。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，具体为一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法。

背景技术

DNA是遗传信息的载体，是重要遗传物质。基因组DNA提取作为分子实验中基础而重要的技术手段应用在各个研究领域。很多研究需要大量实验材料，一定数量及高质量的DNA样品是进行PCＲ扩增、限制性酶切、Southern 杂交、测序等分子生物学研究的保障。DNA提取工作量大，而且纯度要求高，DNA的提取质量和效率严重影响实验结果。因此，用合适的方法获取高质高量的DNA显得极为重要。DNA的提取方法有很多，常用的方法有CTAB法、SDS法等，这些DNA提取方法在原理上基本一致，都是先裂解细胞，再利用有机溶剂进行多次抽提，使蛋白质等沉淀于有机溶剂中，而核酸保留在水相中。由于不同材料在化学成分、组织结构等方面的差异，使不同方法对某一具体材料的提取效率差异很大。其中，CTAB法是一种快速简便的提取总DNA的方法，主要采用机械破碎真菌细胞，然后加入CTAB液分离缓冲液将DNA溶解出来，再经氯仿－异戊醇抽提除去蛋白质，最后得到DNA。对于真菌而言，其细胞中含有较多的蛋白质、糖类、酚类、脂类、色素及其它干扰物，要获取完整的高质量DNA，需要一种高效稳定的方法。因此很多科研工作者都在试图寻找一种既快速便捷又能保证基因组DNA质量 的方法。CTAB及SDS法提取DNA的效果虽还算理想，但也有较大的不足之处，其中，CTAB法虽然可以有效去除真菌材料中的酚类等杂质，但步骤繁琐，耗时过长，DNA提取量不大，使所获DNA浓度及纯度不够高，导致后续实验的成功率受限。SDS法虽可快速提取基因组DNA应用于分子标记，但提取的DNA仅局限于分子标记等对DNA质量要求不高的实验，很难满足对DNA质量要求高的分子实验，如基因克隆、分子杂交等。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法的技术方案，该方法能显著提高DNA的含量、质量及得率，在分子实验中有应用价值。

所述的一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，其特征在于用CTAB法提取DNA的接种时直接用保菌的含目的菌的细沙接种、和/或用配制的孢子悬液均匀涂板接种后再加入细沙培养、和/或培养的菌丝在提取DNA磨样时加入细沙磨样，所有样品均需磨样至菌丝呈现丝滑状超细粉末时止。

所述的一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，其特征在于用CTAB法提取DNA的接种时直接用保菌的含目的菌的细沙接种、配制的孢子悬液均匀涂板接种后再加入细沙培养和培养的菌丝在提取DNA磨样时加入细沙磨样；具体包括以下步骤：

1)在SDAY平板上铺上一层灭菌后的玻璃纸，加入80-120µL的0.02%吐温水，再用含保有目的菌的60-120目细沙0.05-0.12g接种至SDAY玻璃纸上；

2）再取100 µL用灭菌后的0.02%吐温水配制成的1×10⁷个/ml的孢子悬液均匀涂板接种，然后添加60-120目灭菌后的细沙0.05-0.12 g至接种后的平板上，最后24-26℃培养2-3天；