[发明专利]一种蒙药香青兰组织培养再生体系建立的方法

权利要求书

1.一种蒙药香青兰组织培养再生体系建立的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）种子表面消毒及无菌苗培养

挑选籽粒饱满的香青兰种子，经流水冲洗4-7min去除表面尘土杂物，无菌水冲洗4-7次后置于超净工作台上，用体积浓度为70%乙醇浸泡30-40s，无菌水冲洗2-4次；再用体积浓度0.1%HgCl₂消毒4-6min，无菌水震荡冲洗4-6次，接种在含有100mL的MS₀固体培养基三角瓶中，将三角瓶瓶身用牛皮纸包裹，28±2℃条件下培养，待种子萌发后去除牛皮纸光照培养，光照12-14h/d，光照强度1800-22001ux；

2）愈伤组织的诱导：取生长健壮的香青兰无菌苗，切取幼嫩子叶接种于诱导培养基MS₁上，每瓶接种3-4块，无光照下培养9-12d后转入正常光照下培养，13-16d后观察并统计愈伤组织诱导率，诱导光照培养条件为：光照12-14h/d，光照强度1800-22001ux，温度28士2℃；

3）愈伤组织的继代培养：将诱导得到的黄绿色愈伤组织接种在继代培养基MS₂中进行继代培养；继代培养条件为：光照12-14h/d，光照强度1800-22001ux，温度28士2℃；

4）不定芽的诱导分化：将经过连续继代培养3-4次后得到的黄绿色愈伤组织转到不定芽分化培养基MS₃中进行诱导，培养条件为：光照12-14h/d，光照强度1800-22001ux，温度28士2℃；

5）所述诱导生根：经过不定芽诱导得到再生芽2-3片左右时转入诱导生根培养基MS₄进行生根诱导，培养条件为：光照12-14h/d，光照强度1800-22001ux，温度28士2℃；

6）再生植株移栽：再生植株长出4-6条根后，将三角瓶瓶口打开，置于阴凉、空气流通处炼苗，7-8天后将再生苗取出，经流水冲洗掉根基部的培养基残留物，再用蒸馏水冲洗几次，用体积浓度为0.08-0.13%多菌灵浸泡6-8min，转至移栽基质中，基质为松树皮、泥炭土、活苔藓与陶粒，按质量比1：1：1：1混合，外扣遮光塑料，每天浇透水1-3次，培育温度28士2℃，最低温度不低于20℃，待幼苗长出3-4片新叶，苗高8-12cm左右移栽到正常土壤下在自然环境中继续培育。