[发明专利]一种制备胰凝乳蛋白酶的方法

权利要求书

1.一种制备胰凝乳蛋白酶的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

（1）水解：将新鲜或冷冻动物胰脏绞碎置于容器中，加入丙酮搅拌脱水，离心得沉淀物，加入水及胰酶搅拌溶解，用氢氧化钠溶液调至pH值，保温搅拌，再加入硅藻土充分搅拌，过滤；

（2）沉淀：收集滤液，加入丙酮搅匀，静置，虹吸弃去上层丙酮清液，然后用丙酮洗涤沉淀物，过滤甩干，干燥；得胰凝乳蛋白酶粗品；

（3）提纯：将粗品用磷酸缓冲液溶解，搅拌混合，静置，然后加入硅藻土拌匀，过滤；往滤液中加入硫酸铵，过滤后可得盐析物；将盐析物再溶于碳酸缓冲液，然后在搅拌下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，静置，过滤；

（4）滤取晶体并用水冲洗，冷冻干燥，即可得胰凝乳蛋白酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，丙酮与胰脏的比例为2~5L：1kg，丙酮温度0℃以下；氢氧化钠溶液浓度为6%~10%；溶液的pH值调节到6.0~9.0；于15℃~25℃保温搅拌约1~3小时；过滤前，加入硅藻土进行充分搅拌。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，丙酮与滤液的体积比为1.5~3:1；静置时间为：10~14小时；弃去上清液后，用丙酮洗涤沉淀物。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，粗品与磷酸缓冲液的比例是：1g:45~60ml；溶液于15℃~25℃静置15~25小时；按照溶液的体积加入其量3%~7%重量的硅藻土；往滤液中加入硫酸铵的量为使溶液的浓度达到35%~45%；盐析物与碳酸缓冲液的比例是：1g:8~10ml；加入饱和硫酸铵溶液的量为至溶液微浑；静置温度是：0℃~8℃，时间为：48~72小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：得到的胰凝乳蛋白酶晶体要进行冷冻干燥。