[发明专利]一种结核分枝杆菌检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种结核分枝杆菌检测试剂盒，其特征在于，包括：

上游引物，其核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；

下游引物，其核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；

探针，其核苷酸序列如SEQIDNO：3所示，并且在探针的5’端标记荧光基团，在探针的 3’端标记淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述荧光基团为FAM， 所述淬灭基团为MGB。

3.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌检测试剂盒，其特征在于，还包括光敏DNA染料。

4.根据权利要求3所述的结核分枝杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述光敏DNA染料为 叠氮溴化丙锭。

5.根据权利要求1至4任一所述的结核分枝杆菌检测试剂盒，其特征在于，还包括稀释 液、裂解液、PCR混合液、结核分枝杆菌阳性对照液和结核分枝杆菌阴性对照液中的一种或 多种；其中，所述PCR混合液包括PCR缓冲液、DNA聚合酶和dNTPs。

6.权利要求1至5任一所述的结核分枝杆菌检测试剂盒在结核分枝杆菌检测中的应用。

7.一种结核分枝杆菌检测方法，其特征在于，采用权利要求1至5任一所述的结核分枝 杆菌检测试剂盒进行，所述方法包括如下步骤：

1)对待测样本进行液化处理，制得液化样本；

2)向所述液化样本中加入光敏DNA染料，避光孵育后进行光照处理，制得处理样本；

3)提取所述处理样本的DNA，并以所述DNA为模板进行荧光定量PCR，得到Ct值；若Ct值 ≥36则为阴性，若Ct值<36则为阳性。

8.根据权利要求7所述的结核分枝杆菌检测方法，其特征在于，步骤1)包括：向待测样 本中加入质量含量为4％的NaOH溶液，震荡后静置，随后加入缓冲液并离心，弃上清液后加 入缓冲液重悬沉淀，制得液化样本。

9.根据权利要求7所述的结核分枝杆菌检测方法，其特征在于，步骤2)包括：向所述液 化样本中加入叠氮溴化丙锭至终浓度为10-20μg/mL，置于2-6℃暗处理1-3h，随后避光孵育 15-25min，再光照处理15-25min，制得处理样本。

10.根据权利要求7所述的结核分枝杆菌检测方法，其特征在于，所述荧光定量PCR的反 应体系为：所述探针2μL，所述上游引物2μL，所述下游引物2μL，所述DNA2μL，无RNA酶的水2 μL，PCR混合液10μL；反应程序为：95℃预变性2min，95℃变性5秒，60℃退火20秒，共40个循 环。