[发明专利]一种基于荧光共振能量转移技术的血管活性肠肽I型受体抑制剂高通量筛选方法在审
| 申请号： | 201510828140.2 | 申请日： | 2015-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN105466897A | 公开（公告）日： | 2016-04-06 |
| 发明（设计）人： | 严明;沈灵;孙丹丹;何玲;张陆勇 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 211215 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 荧光 共振 能量 转移 技术 血管 活性 受体 抑制剂 通量 筛选 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种血管活性肠肽I型受体抑制剂高通量筛选模型，其特征在于，包括步骤：
(1)血管活性肠肽I型受体抑制剂筛选模型的建立与优化；
(2)阳性药验证模型可靠性；
(3)高通量筛选模型验证。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中进行确定VIP和血管活性肠肽I型受体细胞最适浓度的实验。
3.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，配制不同浓度的VIP，每孔加入5μl，再每孔加入5μl含血管活性肠肽I型受体细胞的1×反应buffer，室温孵育45分钟，检测荧光强度，确定最适VIP浓度为236μM；配制不同浓度的血管活性肠肽I型受体细胞，每孔加入5μl，再每孔加入5μl含VIP的1×反应buffer，室温孵育45分钟，检测荧光强度，确定最适多血管活性肠肽I型受体细胞浓度为500cells/well。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)配制不同浓度的阳性药VIP(1-7)-GRF(8-27)，每孔加入2.5μl，配制最适浓度的VIP，每孔加入5μl(空白对照加5μl1×反应buffer)，室温孵育45分钟，检测荧光强度，计算得出阳性药的IC50为2980μM。
5.权利要求1-5中所述任一所述的方法在筛选血管活性肠肽I型受体抑制剂的应用。
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