[发明专利]用于室温原位检测生物样品中的目标核酸的方法和试剂盒

权利要求书

1.探针、包含0.07M氢氧化钠和70％乙醇的变性溶液、包含3mM氢氧化钠、30％甲酰胺和20％硫酸葡聚糖的杂交缓冲液和包含1.75mM氢氧化钠和2×SSC的洗涤缓冲液在制备用于检测生物样品中的目标核酸的试剂盒中的用途，其中所述探针包含与所述目标核酸中的核苷酸序列互补的核苷酸序列和至少一个可检测标记，所述检测包括步骤：

a)通过用所述包含0.07M氢氧化钠和70％乙醇的变性溶液接触所述样品，使包含所述目标核酸的生物样品变性；

b)使所述探针与所述目标核酸在所述包含3mM氢氧化钠、30％甲酰胺和20％硫酸葡聚糖的杂交缓冲液中杂交，其中所述杂交缓冲液的pH为10至13；

c)在所述包含1.75mM氢氧化钠和2×SSC的洗涤缓冲液中洗涤所述样品，其中所述洗涤缓冲液的pH为10至13；和

d)检测已与所述样品中的目标核酸杂交的探针上的所述至少一个可检测标记，由此检测所述样品中的目标核酸，

其中，步骤a)、b)和c)中的每一个均在19摄氏度至25摄氏度的温度下进行。

2.一种用于检测生物样品中的目标核酸的试剂盒，其包括：

a)包含0.07M氢氧化钠和70％乙醇的变性缓冲液；

b)包含1-5mM氢氧化钠、20-60％甲酰胺和5-40％硫酸葡聚糖的杂交缓冲液，其中所述杂交缓冲液的pH为10至13；和

c)包含1-3mM氢氧化钠的洗涤缓冲液，其中所述洗涤缓冲液的pH为10至13。

3.权利要求2所述的试剂盒，进一步包含蛋白酶缓冲液，所述蛋白酶缓冲液包含0.2％胃蛋白酶。

4.权利要求2所述的试剂盒，进一步包含至少一个包含与所述目标核酸中的核苷酸序列互补的核苷酸序列和至少一个可检测标记的探针。

5.权利要求2-4任一项所述的试剂盒，其中所述杂交缓冲液包含3mM氢氧化钠、30％甲酰胺和20％硫酸葡聚糖。

6.权利要求2-4任一项所述的试剂盒，其中所述洗涤缓冲液包括1.75mM NaOH和2×SSC。