[发明专利]用于室温原位检测生物样品中的目标核酸的方法和试剂盒

说明书

本发明涉及用于检测生物样品中的目标核酸的原位杂交方法，包括在室温下进行一个或多个方法步骤(例如，预处理、变性、杂交、洗涤)。本发明进一步涉及用于进行这种方法的试剂盒。

本申请是申请日为2012年12月12日、申请号为2012800690167、发明名称为“用于室温原位检测生物样品中的目标核酸的方法和试剂盒”的发明专利申请的分案申请。

相关申请

本申请要求2011年12月12日提交的美国临时申请号61/569,656的权益。

上述申请的全部教导通过引用并入本文中。

背景技术

20多年来，荧光原位杂交(FISH)已用作检测人类染色体上DNA序列的分子技术(Bauman 1985；Pinkel 1986)。在过去的二十年，FISH技术各个方面的改进已促进人类细胞遗传学和分子诊断领域，使得能够鉴定与实性肿瘤和造血系统恶性肿瘤有关的染色体异常以及诊断感染性疾病。(Heim和Mitelman 1995；Klinger 1995；Timm,Podniesinski等.1995；Heselmeyer,Macville等.1997；Sauer,Wiedswang等.2003).

当前的FISH程序是劳动密集型和费时的，要求多个手动处理步骤和遵守精确的温度和时间要求。标准FISH技术通常要求十多个处理玻片样品的步骤，其中几个步骤在不同温度下进行，需要使用许多通常昂贵的温度设备如水浴器、加热板和孵育箱。这些及其它技术上的限制妨碍其在研究和临床实验室中更广泛地使用。

目前，需要要求更少处理步骤、更少时间和更少设备的进行FISH的更简化且成本有效的方法。

发明概述

在一个实施方式中，本发明涉及用于检测生物样品中的目标核酸的方法，包括步骤：在约19摄氏度至约25摄氏度的温度下用包含蛋白酶的溶液预处理包含目标核酸的生物样品；使所述样品变性；使至少一个探针与所述样品中的目标核酸杂交，其中所述探针包含与所述目标核酸中的核苷酸序列基本上互补的核苷酸序列和至少一个可检测标记；和检测与所述目标核酸杂交后的寡核苷酸探针上的至少一个可检测标记，由此检测所述样品中的目标核酸。

在另一实施方式中，本发明涉及用于检测生物样品中的目标核酸的方法，包括步骤：在约19摄氏度至约25摄氏度的温度下，使至少一个探针与所述样品中的目标核酸杂交，其中所述探针存在于包含约1-10mM碱且pH为约10至约13的杂交缓冲液中，并且包含与所述目标核酸中的核苷酸序列基本上互补的核苷酸序列和至少一个可检测标记；和检测与所述样品中的目标核酸杂交后的探针上的至少一个可检测标记，由此检测所述样品中的目标核酸。

在另一实施方式中，本发明涉及用于检测生物样品中的目标核酸的方法，包括步骤：使包含目标核酸的生物样品变性；使至少一个探针与所述样品中的目标核酸杂交，其中所述探针包含与所述目标核酸中的核苷酸序列基本上互补的核苷酸序列和至少一个可检测标记；在约19摄氏度至约25摄氏度的温度下，在pH为约10至约13的洗涤缓冲液中洗涤所述样品，所述洗涤缓冲液包含约1-10mM的碱和最终浓度为约0.03M至约0.09M的一种或多种盐；和检测已与所述样品中的目标核酸杂交的探针上的至少一个可检测标记，由此检测所述样品中的目标核酸。