[发明专利]一种从人体粪便中分离肠道菌群的方法

说明书

本发明涉及一种从人体粪便中分离肠道菌群的方法。它依次包括有以下步骤：1）采样；2）均质过滤；3）离心分离洗涤；所述步骤3），先采用稀释液洗涤，后于转速为7000～15000rpm条件下离心，每次离心5～25分钟，洗涤离心1～5次。本发明能减少肠道菌群液制备过程中的污染问题，避免工作人员在制备过程中的不适感，也能保证产品具有更优异的品质。

技术领域

本发明涉及微生物分离提取技术领域，尤其涉及一种从人体粪便中分离肠道菌群的方法。

背景技术

近年来，由于抗生素的滥用导致肠道菌群失调普遍增多，肠道等疾病的治愈难度增加，新抗生素的研发成本及其新的耐药菌株增加等副作用，研究人员再次把目光投向了用提取健康人的肠道菌群来重建因肠道菌群失调引起的肠道等疾病。目前，研究者们都将重心放在了肠道菌群临床治疗疾病的种类和疗效上，而对于肠道菌群的制备，却往往采用简陋的方法，例如，先采用普通的塑料盒、塑料袋采样，后用普通均质机均质粪便，然后再离心或者筛网过滤等等。采用这些简陋的方法而制备的肠道菌群液杂质和色素多、感官差；其制备过程中使用的开放性器皿容易受污染和交叉污染，其制备操作也给工作人员带来了感官及心理的强烈负面冲击而引起不适。因此，采用简陋的方法来分离提取制备肠道菌群液，无论是其操作过程，还是制作产品的品质方面，都严重地影响了医务工作者的应用和病人对该项目的接受度，阻碍和延缓了肠道菌群液在临床上的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从人体粪便中分离肠道菌群的方法，该方法能减少肠道菌群液制备过程中的污染问题，避免工作人员在制备过程中的不适感，也能保证产品具有更优异的品质。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种从人体粪便中分离肠道菌群的方法，其特征在于，它依次包括有以下步骤：1）采样；2）均质过滤；3）离心分离洗涤；所述步骤3），先采用稀释液洗涤，后于转速为7000～15000rpm条件下离心，每次离心5～25分钟，洗涤离心1～5次。

进一步优选地，上述离心分离洗涤的次数为4次。

为除去分离液中可能存在的寄生虫卵，上述从健康人体粪便中分离肠道菌群的方法，还包括有过滤操作，且过滤操作在离心分离洗涤的操作前后或过程中进行。所述过滤操作选用分级过滤器进行；所述分级过滤器中过滤网的孔径从大到小在0.2mm～0.04mm范围内设置。

作为进一步明确，上述均质过滤步骤，采用均质过滤袋和拍打式均质器；所述均质过滤袋的内部有滤膜夹层。为实现更有效除去粪便中的色素、杂质和异味，该滤膜夹层上的滤膜孔孔径大小为0.1mm～0.45mm。进一步优选地，所述滤膜夹层上的滤膜孔孔径大小为0.1～0.25mm。

为进一步避免采用过程中样品的污染和损失，简化采样操作，避免环境污染，减少操作人员处理样品的不适感，上述步骤1），采用专用的双层采样袋；所述双层采样袋为内、外两层，其袋体上部设有撕口；所述内层的下部向上折叠，且底端固定在内层的一侧外壁上；所述内层的下部上设有一撕口。

作为进一步优化，上述从人体粪便中分离肠道菌群的方法，依次包括有以下步骤：

1）无菌采样

采用双层采样袋取样；所述双层采样袋为内、外两层，其袋体上部设有撕口；所述内层的下部向上折叠，且底端固定在内层的一侧外壁上；所述内层的下部上设有一撕口。

2）拍打均质过滤

将上述双层采样袋上的撕口撕开，弃去外层，将内层放入无菌均质过滤袋中，撕开内层下部上的撕口，粪便样品直接从撕口形成的通道中进入均质过滤袋；所述均质过滤袋的内部有滤膜夹层，袋口处设置有封口条；该滤膜夹层上的滤膜孔孔径大小为0.1mm～0.45mm；之后加入稀释液，稀释液为无菌水或生理盐水，或者其它灭菌液体，最后再采用拍打式均质器均质，样品粉碎均质过滤后，制得均质过滤液；