[发明专利]一种根皮苷衍生物合成方法

说明书

一、技术领域：

本发明涉及一种生物催化制备根皮苷衍生物的方法，具体涉及一种根皮苷衍生物合成方法。

二、背景技术：

根皮苷是由根皮素和葡萄糖苷结合而成的一种天然产物，属于自然界很少存在的“少数黄酮”—二氢查尔酮类，其被证实具有多种生物活性，如降血糖、抗氧化、延缓衰老、治疗高尿酸血症、抑制黑色素和抑菌作用等。

黄酮类物质对生物体的有效性与其达到生物体活性部位的有效剂量密切相关。在生物体内，根皮苷会被乳糖-根皮苷水解酶(LPH)水解成为根皮素，降低或者失去其生物活性，因此，改善或者修饰黄酮类物质的结构，是提高其生物利用率的有效途径。目前黄酮类物质结构修饰的方法有化学法、微生物法和酶法，化学催化成本较低，但反应位点不易控制，反应副产物较多；微生物法生成的产物不易分离；酶法反应条件温和，且位点选择性高，是结构复杂的黄酮苷类结构修饰的普遍方法。

三、发明内容

本发明提供一种反应条件温和，温度低，生产能耗小，环境污染少的根皮苷衍生物的合成方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种根皮苷衍生物合成方法，其特征在于：所述的合成方法为：根皮苷与酰基供体在脂肪酶435的存在下反应得到根皮苷衍生物；

所述的根皮苷衍生物的反应式为：

a为反应条件：溶剂丙酮，脂肪酶435，47℃真空恒温搅拌36h～48h；

R为酰基供体，酰基供体为C₁₇H₃₅COOH，C₁₅H₃₁COOH或C₁₃H₂₇COOH。

所述的一种根皮苷衍生物合成方法，其特征在于：所述的具体合成方法为：

(1)根皮苷、酰基供体、分子筛3A、催化剂和丙酮在反应器内混合均匀，在45～48℃惰性气体条件下保温，同时不断搅拌，反应36～48h后终止反应；

(2)然后采用丙酮作为洗脱剂将反应物洗脱入离心管中离心，将所有的反应产物洗脱干净，收集上清液，将收集的上清液旋转蒸发至干,并称量旋干后的粗产物，采用硅胶柱层析，合并含根皮苷衍生物的流份；

(3)将合并的含根皮苷衍生物的流份真空浓缩，干燥，得产品。

步骤1)中催化剂是脂肪酶435，浓度0.17～0.26g/mL；

根皮苷纯度≥98％，反应体系中根皮苷的浓度0.071～0.1g/mL；

搅拌以100～120r/min的速度进行。

步骤(2)中硅胶柱层析方法为：采用干法上样，以丙酮-甲苯为洗脱剂进行4次梯度洗脱，4次洗脱剂体积比比例为1:6、30:75、1:1、2:3，全程TLC板检测。

步骤(3)中真空浓缩温度为55～60℃，真空度为-0.09MPa；

干燥方法为：将浓缩物放在真空干燥箱中，在温度55～60℃下真空干燥到产品恒重。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果：

本发明采用酶法合成6″-O-豆蔻酸根皮苷酯、6″-O-硬脂酸根皮苷酯、6″-O-软脂酸根皮苷酯，确定了酶法合成的工艺路线和条件，产品质量符合产品质量控制标准。

本发明采用硅胶柱层析对反应产物中6″-O-豆蔻酸根皮苷酯、6″-O-硬脂酸根皮苷酯、6″-O-软脂酸根皮苷酯进行分离纯化，确定了洗脱剂组成等条件对分离效果的影响，分离出纯度高的根皮苷衍生物。

四、具体实施方式：

一种根皮苷衍生物合成方法为：根皮苷与酰基供体在脂肪酶435的存在下反应得到根皮苷衍生物；

所述的根皮苷衍生物的反应式为：

a为反应条件：溶剂丙酮，脂肪酶435，47℃真空恒温搅拌36h～48h；

R为酰基供体，酰基供体为C₁₇H₃₅COOH，C₁₅H₃₁COOH或C₁₃H₂₇COOH。

所述的具体合成方法为：

(1)根皮苷、酰基供体、分子筛3A(3A分子筛)、催化剂和丙酮在反应器内混合均匀，在45～48℃惰性气体条件下保温，同时不断搅拌，反应36～48h后终止反应；