[发明专利]一种检测转基因CaMV35S启动子的电极的制备方法及用途在审

专利信息
申请号: 201510848286.3 申请日: 2015-11-27
公开(公告)号: CN105372307A 公开(公告)日: 2016-03-02
发明(设计)人: 李雅琪;王坤;蔡建荣;孙力 申请(专利权)人: 江苏大学
主分类号: G01N27/327 分类号: G01N27/327
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 212013 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 检测 转基因 camv35s 启动子 电极 制备 方法 用途
【说明书】:

技术领域

发明涉及电化学用电极的制备领域,具体指一种检测转基因CaMV35S启动子的电极 的制备方法及用途。

背景技术

转基因作物(GeneticallyModifiedCrops,简称GMC)是指利用生物技术,把从动物、 植物或微生物等生物体中经鉴定、分离的目的基因插入植物基因组中,改变其遗传组成,产 生新的农艺性状的植物。自1994年转基因番茄在美国的首次商业化以来,生物技术已被广 泛用于现代农业。目前全球批准商业化种植的转基因生物已有100多种,种植转基因作物的 国家有29个,转基因作物的种植面积也由1996年的170万hm2增加至2011年的16000万 hm2。很多国家根据将已批准的部分转基因作物作为食品或饲料的生产原料,与此同时转基 因产品的安全性受到了广泛关注。

目前转基因检测方法主要是基于外源蛋白靶标的检测和基于核酸的检测。以外源蛋白为 靶标的检测方法是基于抗体对抗原的特异性识别,主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫试纸 条法和蛋白质芯片,但是这些方法背景信号高、蛋白质活性难以长久保持、开发特异性抗体 的成本高、加工过的转基因产品其蛋白质发生变性而无法进行检测。基于核酸的检测方法最 常用的是聚合酶链式反应(PCR)是最常用的转基因检测方法,但样品需要量大,操作繁琐,耗 时,结果的准确性易受假阳性和假阴性的影响。

石墨烯具有更高的机械强度,更大的比表面积以及更低廉的制备成本,这些特点使得石 墨烯成为了新的优良载体,而纳米金(AuNPs)和石墨烯形成的复合材料,不只拥有原本优 异性能,如大的比表面积、出色的导电性、催化性,以及优良的化学稳定性等,而且两组分 之间还存在着协同作用,因此极大地改善了复合材料的性能也使得石墨烯/金纳米粒子复合物 在催化、生物传感器、光谱学、能量存储等领域展现出许多优异的性能和潜在的应用价值。

碲化镉量子点(CdTeQDs)是一种半导体纳米材料,通过调节粒径,可以得到从整个可见 光波段到紫外光波段的禁带宽度,具有大的载流子移动率,高的光吸收特性和热稳定性等,在 紫外光或电子激发下能产生高效的发光。在光电性质方面,不仅具有良好的发光性能,而且还 是好的电子受体材料,因而在电致发光器件和光电电池器件方面都得到广泛的研究和应用。

二氧化硅纳米球具有小尺寸、水溶性良好、比表面积大、生物相容性好、无毒且能和多 种生物分子偶联等优点,是量子点的理想载体。

光致电化学传感器是一种以光能作为激发能量,电信号作为检测信号的传感器。

本发明以碲化镉包覆的硅球(SiO2@CdTe)为光电信号标志物。首先将ITO电极表面依 次修饰上石墨烯/金(rGO/AuNPs)、DNA探针1(Probe1)、目标DNA(T-DNA)、DNA探针 2(Probe2)-碲化镉包覆的硅球(SiO2@CdTe),构建的光电化学传感器大大提高了灵敏度。 该检测体系以ITO为工作电极、饱和甘汞电极为参比电极,铂电极为对电极,以光电流为检 测信号,通过对不同浓度的目标DNA检测,建立标准曲线,以达到对作物及产品定量检测 的目的。

发明内容

本发明旨在发明一种集免标记、高灵敏度、高选择性、简单易操作等优点为一体的光电 化学传感器,提供一种制备工艺简单,灵敏度高,测量范围宽,成本低的定量检测含有 CaMV35S启动子转基因作物及产品的方法,解决现有检测成本高、检测方案复杂、检测时间 过长、灵敏度较低的难题。

本发明是通过以下技术方案实现的:

步骤1、还原氧化石墨烯/金纳米复合材料RGO/Au的制备步骤;

步骤2、二氧化硅纳米微球@碲化镉纳米复合材料SiO2@CdTe的制备步骤;

步骤3、在ITO电极上制备探针1(Probe1)的步骤:将RGO/Au分散于蒸馏水中得到 RGO/Au分散液后滴涂于ITO电极表面的修饰区,进行干燥;取溶有探针1的tris-HCl缓冲 液滴涂于所述干燥后的RGO/Au表面,进行干燥;冲洗电极表面后,进行干燥,得到 ITO-rGO/Au-Probe1;

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