[发明专利]用于转染细胞的方法和产品有效
| 申请号： | 201510853689.7 | 申请日： | 2012-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN105368854B | 公开（公告）日： | 2019-08-13 |
| 发明（设计）人： | M·安吉尔;C·罗德 | 申请（专利权）人： | 菲克特生物科学股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12N15/85 |
| 代理公司： | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 | 代理人： | 李程达 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 转染 细胞 方法 产品 | ||
1.重新编程分化的细胞为多能干细胞的方法，包括：
a.使用重新编程培养基培养分化的细胞；
b.使用一种或多种合成的RNA分子转染所述分化的细胞，其中所述一种或多种合成的RNA分子包括至少一种编码一种或多种重新编程因子的RNA分子，并且其中所述转染导致所述分化的细胞表达所述一种或多种重新编程因子；和
c.在连续5天期间重复步骤(b)至少2次，其中一次或多次后面的转染中所转染的一种或多种合成的RNA分子的量大于一次或多次前面的转染中所转染的量，以使所述细胞被重新编程为多能干细胞，
其中在不使用供给者细胞的情况下进行步骤a至c。
2.权利要求1的方法，其中所述重新编程培养基基本上不含免疫抑制剂。
3.权利要求1的方法，其中所述分化的细胞是成纤维细胞。
4.权利要求3的方法，其中所述成纤维细胞源自活组织检查样品。
5.权利要求4的方法，其中活组织检查样品是全厚度皮穿孔活组织检查样品。
6.权利要求1的方法，其中所述细胞培养物具有小于20,000个细胞/cm2的起始细胞密度。
7.权利要求1的方法，其中所述细胞培养物具有2,000个细胞/cm2至20,000个细胞/cm2的起始细胞密度。
8.权利要求1的方法，其中所述方法还包括在转染后冲洗所述分化的细胞的步骤。
9.权利要求1的方法，其中所述重新编程培养基包括细胞粘附分子。
10.权利要求9的方法，其中所述细胞粘附分子选自纤连蛋白和玻连蛋白中的一种或多种。
11.权利要求9的方法，其中所述细胞粘附分子是重组的。
12.权利要求1的方法，其中所述一种或多种合成的RNA分子包括至少一种编码下组中的至少一个成员的RNA分子：Oct4蛋白、Sox2蛋白、Klf4蛋白和c-Myc蛋白。
13.权利要求1的方法，其中所述一种或多种合成的RNA分子包括下组中的至少一个成员：假尿苷残基和5-甲基胞苷残基。
14.权利要求1的方法，其中前面的转染中转染的一种或多种合成的RNA分子的量是约20ng/cm2至250ng/cm2。
15.权利要求1的方法，其中后面的转染中转染的一种或多种合成的RNA分子的量是约100ng/cm2至600ng/cm2。
16.权利要求1的方法，其中所述方法包括至少5次转染并且对于所转染的一种或多种合成的RNA分子的量：第一次转染是约25ng/cm2，第二次转染是约50ng/cm2，第三次转染是约100ng/cm2，第四次转染是约200ng/cm2，并且第五次转染是约400ng/cm2。
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