[发明专利]用于转染细胞的方法和产品

说明书

本发明部分涉及编码蛋白质的核酸；含有非规范核苷酸的核酸；包含核酸的治疗剂；用于诱导细胞表达蛋白质的方法、试剂盒和装置；用于转染、基因编辑和重新编程细胞的方法、试剂盒和装置；以及使用这些方法、试剂盒和装置产生的细胞、生物体和治疗剂。本文公开了使用RNA用于诱导细胞表达蛋白质和用于重新编程和基因编辑细胞的方法。还公开了用于从患者样品中产生细胞的方法、使用这些方法产生的细胞以及包含使用这些方法产生的细胞的治疗剂。

本申请是申请号为201280068223.0的专利申请的分案申请。

优先权

本申请要求2011年12月5日提交的美国临时申请号61/566,948、2011年12月12日提交的美国临时申请号61/569,595、2012年4月24日提交的美国临时申请号61/637,570、2012年5月7日提交的美国申请号13/465,490以及2012年6月26日提交的美国临时申请号61/664,494的优先权，所述申请都特此以引用的方式整体并入。

发明领域

本发明部分涉及编码蛋白质的核酸；含有非规范核苷酸的核酸；包含核酸的治疗剂；用于诱导细胞表达蛋白质的方法、试剂盒和装置；用于转染、基因编辑和重新编程细胞的方法、试剂盒和装置；以及使用这些方法、试剂盒和装置产生的细胞、生物体和治疗剂。

电子呈送的文本文件的描述

由此电子呈送的文本文件的内容以引用的方式整体并入本文：序列表的计算机可读格式副本(文件名：FABI_001_01WO_SeqList_ST25.txt；记录日期：2012年12月4日；文件大小：18KB)。

背景

核酸转染

可以通过在体外和体内使核酸与带电的脂质、利匹哆异德(lipidoid)、肽、其聚合物或混合物预先复合来将核酸递送至细胞。此类转染试剂为可商购的，并且广泛用于将核酸递送至培养的细胞。暴露于转染试剂-核酸复合物的细胞可以通过内吞作用或其它方式内化这些复合物。一旦在细胞里面，核酸可以进行它的预期的生物功能。在蛋白质编码RNA的情况下，例如，RNA可以通过细胞的核糖体翻译成蛋白质。

无血清细胞培养

动物血清如胎牛血清(FBS)通常用作细胞培养基中的补充剂以促进许多类型的细胞的生长。然而，血清的不确定性质使得与这种组分接触的细胞对于研究和治疗应用而言不可取。因此，已开发了无血清细胞培养基以消除批料与批料之间的变化和被与血清缔合的毒性物质和/或病原物质污染的危险。

血清中最丰富的蛋白质为血清白蛋白。血清白蛋白在体外和体内结合各种各样的分子，包括激素、脂肪酸、钙离子和金属离子以及小分子药物，并且可以在体外和体内将这些分子运输至细胞。血清白蛋白(最经常地牛血清白蛋白(BSA)或人血清白蛋白(HSA))是无血清细胞培养基中的常见成分，其中它通常在1g/L至10g/L的浓度下使用。血清白蛋白传统上通过乙醇分级分离(“科恩(Cohn)”工艺)由血浆制备。分离含有血清白蛋白的级分(“科恩级分V”或简单地“级分V”)，并且通常不需进一步处理而使用。因此，血清白蛋白的标准制剂包含蛋白质部分(血清白蛋白多肽)和缔合分子部分(包括结合血清白蛋白多肽的盐、脂肪酸等等)。血清白蛋白的缔合分子组分的组成通常是复杂和未知的。