[发明专利]一种阿胶及其衍生产品高纯度DNA的提取试剂盒及其提取方法

权利要求书

1.一种阿胶及其衍生产品高纯度DNA的提取试剂盒，其特征在于，由组分I、组分II、蛋白酶K溶液和RNA酶溶液组成；

所述组分I的组成为：0.08-0.12M十二烷基硫酸钠，0.8-1.2MTris-HCl，0.4-0.6MNa₂EDTA，PH＝7.5-8.5；

所述组分II的组成为：8.0-8.5MCsCl，8-12mMTris-HCl，PH＝7.5-8.5。

2.如权利要求1所述的提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶液的浓度为15-25mgmL^-1；所述RNA酶溶液的浓度为80-120mgmL^-1。

3.如权利要求1所述的提取试剂盒，其特征在于，所述组分I的组成为：0.1MSDS，1.0MTris-HCl，0.5MNa₂EDTA，PH＝8.0。

4.如权利要求1所述的提取试剂盒，其特征在于，所述组分II的组成为：8.3MCsCl，10mMTris-HCl，PH＝8.0。

5.采用权利要求1至4任一项所述的提取试剂盒从阿胶及其衍生产品中提取高纯度DNA的方法，其特征在于，步骤为：向待检的阿胶或其衍生产品中加入提取试剂盒中的组分I、蛋白酶K溶液和RNA酶溶液，经沉淀、分离得到DNA粗提物，阿胶或其衍生产品与组分I、蛋白酶K溶液、RNA酶溶液加入量的比为(0.5-1.2)g：(0.8-1.2)mL：(4-6)μL：(4-6)μL；

向DNA粗提物中加入组分II溶解，250000-260000g离心28-32h，使组分II形成连续的密度梯度，将溶解在组分II中DNA粗提物的DNA与杂质分离，即得到进一步提纯的DNA。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)向待检的阿胶或其衍生产品中加入组分I、蛋白酶K溶液和RNA酶溶液，混匀，60-70℃水浴1-2h，离心，取上清，得溶液A；

(2)向溶液A中加入(0.08-0.12)倍体积的乙酸钾溶液和(1.5-2.5)倍体积的乙醇溶液，放置，离心，弃上清，得沉淀B；

(3)向沉淀B中加入组分II溶解，测定溶解后的溶液中DNA的含量，按DNA：双苯酰亚胺＝2:1加入双苯酰亚胺染色，混匀，避光过夜，调节溶液折射率为1.3-1.4，离心，吸取DNA条带，得溶液C；

(4)向溶液C中加入等体积异丙醇，混匀，分层后弃去上层溶液，重复此过程直至在UV365nm下观察不到荧光，再加入2-3倍体积的乙醇，离心，弃去上清，洗涤沉淀，晾干后加入ddH₂O溶解得到阿胶DNA溶液。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，阿胶或其衍生产品与组分I、蛋白酶K溶液、RNA酶溶液加入量的比为(0.5-1.2)g：1mL：5μL：5μL。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，放置的条件为：在液氮中放置5min，或-80℃放置0.5h，或-20℃放置1h。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述双苯酰亚胺的浓度为0.5mgmL^-1。

10.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，离心的条件为：254800g离心30h。