[发明专利]一种阿胶及其衍生产品高纯度DNA的提取试剂盒及其提取方法

说明书

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种阿胶及其衍生产品高纯度DNA的提取试剂盒及其提取方法。

背景技术

现代药典将阿胶定义为：以马科动物驴的皮经煎煮、浓缩制成的固体胶。其味甘、平，入肺、肝、肾经，具有补血止血、滋阴润燥等功效，药食两用。目前阿胶市场价格大幅上涨，各地均出现了用其他动物皮熬制的代用品，采用骨胶、杂皮等熬制的胶类假药不仅临床效果差，而且还可能出现中毒现象。就驴皮胶或马皮胶或牛皮胶等外观来看十分相似，难以辨别。加之造假者多以在驴皮中掺入部分杂皮胶，使得阿胶的鉴别更是难上加难。目前较前沿的鉴别方法为分子鉴定法，即将阿胶的DNA提取出来，利用分子生物学手段(如PCR技术)检测所提取DNA的动物来源，以确定阿胶的真伪。但由于阿胶本身属于蛋白质成分高且黏性大的物质，致使DNA提取较难，而且其在制作过程中，原料经反复熬煮，致使DNA部分遭到破坏，更增加了DNA提取的难度。近几年，阿胶衍生产品如阿胶糕、阿胶液等大量涌现，其阿胶成分的含量进一步降低，致使其DNA提取的难度进一步加大。

从成分复杂的阿胶及其衍生产品中提取的DNA，其中多含有能干扰PCR的抑制物，容易导致DNA检测失败(假阴性)。大部分PCR抑制因子(蛋白质、多糖、酚类、脲、腐酸和血红素等)都与DNA有相似的溶解性，使用经典DNA提取方法(CTAB/SDS，蛋白酶和酚-氯仿-异戊醇处理)不容易完全除去，这些物质成了DNA最终提取液的污染物。此外，经典DNA提取方法中使用的酚、氯仿等有机试剂具有较大的毒性和腐蚀性，存在危害检验人员身心健康的风险。除经典DNA提取方法外，发明专利(申请号：CN201410317118.7)还公开了一种从阿胶中快速提取DNA的试剂盒及其提取方法，但该试剂盒中所用试剂种类较多，价格昂贵，且个别试剂稀缺不容易购买，从而增加了检测和时间成本。

因此，提供一种适用于从成分复杂的阿胶及其衍生产品中提取DNA的试剂盒是目前亟待解决的问题，对于阿胶及其衍生产品的分子学鉴定具有十分重要的意义。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种阿胶及其衍生产品高纯度DNA的提取试剂盒及其提取方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种阿胶及其衍生产品高纯度DNA的提取试剂盒，由组分I、组分II、蛋白酶K溶液和RNA酶溶液组成；

所述组分I的组成为：0.08-0.12M十二烷基硫酸钠(SDS)，0.8-1.2MTris-HCl，0.4-0.6MNa₂EDTA，PH＝7.5-8.5；

所述组分II的组成为：8.0-8.5MCsCl，8-12mMTris-HCl，PH＝7.5-8.5。

所述蛋白酶K溶液的浓度为15-25mgmL^-1；优选的，所述蛋白酶K溶液的浓度为20mgmL^-1。

所述RNA酶溶液的浓度为80-120mgmL^-1；优选的，所述RNA酶溶液的浓度为100mgmL^-1。RNA酶溶液的主要作用是降解残存的RNA，进一步的提高DNA的纯度；因此RNA酶溶液的浓度需要适度，不宜过高或过低，过高会增加DNA提纯的难度，过低则会使RNA降解不彻底。

优选的，所述组分I的组成为：0.1MSDS，1.0MTris-HCl，0.5MNa₂EDTA，PH＝8.0。

优选的，所述组分II的组成为：8.3MCsCl，10mMTris-HCl，PH＝8.0。

本发明还提供了采用该提取试剂盒从阿胶及其衍生产品中提取高纯度DNA的方法，步骤为：向待检的阿胶或其衍生产品中加入提取试剂盒中的组分I、蛋白酶K溶液和RNA酶溶液，经沉淀、分离得到DNA粗提物，阿胶或其衍生产品与组分I、蛋白酶K溶液、RNA酶溶液加入量的比为(0.5-1.2)g：(0.8-1.2)mL：(4-6)μL：(4-6)μL；

向DNA粗提物中加入组分II溶解，250000-260000g离心28-32h，使组分II形成连续的密度梯度，将溶解在组分II中DNA粗提物的DNA与杂质分离，即得到进一步提纯的DNA。

上述提取高纯度DNA的方法，具体步骤如下：