[发明专利]利用CRISPR/Cas9系统定点修饰ALS基因获得抗除草剂水稻的系统及其应用

权利要求书

1.用于植物基因组定点修饰的载体组合物，含有用于植物基因组定点修饰的载体和供体DNA；所述用于植物基因组定点修饰的载体含有Cas9蛋白表达盒、gRNA表达盒和供体DNA；所述gRNA表达盒编码两种gRNA，所述两种gRNA分别靶向于目的植物的靶DNA的两个靶位点；所述靶DNA中待定点修饰片段位于所述两个靶位点之间；所述两个靶位点中位于上游的靶位点为上游靶位点，位于下游的靶位点为下游靶位点；

所述供体DNA含有所述上游靶位点、所述下游靶位点和位于所述上游靶位点和所述下游靶位点之间的定点修饰片段；所述定点修饰片段为要替换所述待定点修饰片段的DNA片段；

所述上游靶位点为SEQ ID No.1的第7590-7609位所示的DNA片段；所述下游靶位点为SEQ ID No.1的第8032-8051位所示的DNA片段；所述定点修饰片段为SEQ ID No.1的第7716-7979位所示的DNA片段；

所述gRNA表达盒包括gRNA表达盒1和gRNA表达盒2，所述gRNA表达盒1编码gRNA1，所述gRNA表达盒2编码gRNA2，所述gRNA1靶向于所述上游靶位点，所述gRNA2靶向于所述下游靶位点。

2.根据权利要求1所述的载体组合物，其特征在于：所述植物或所述目的植物为单子叶植物。

3.根据权利要求2所述的载体组合物，其特征在于：所述单子叶植物为禾本科植物。

4.根据权利要求1-3中任一所述的载体组合物，其特征在于：所述靶DNA为编码乙酰乳酸合成酶的基因；所述乙酰乳酸合成酶为氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质。

5.根据权利要求1-3中任一所述的载体组合物，其特征在于：所述gRNA表达盒1的序列为SEQ ID No.1的第261-747位所示的DNA片段；所述gRNA表达盒2的序列为SEQ ID No.1的第8328-8814位所示的DNA片段。

6.一种用于植物基因组定点修饰的方法，包括向目的植物中导入权利要求1所述用于植物基因组定点修饰的载体组合物，得到植物基因组被定点修饰的植物；所述植物为单子叶植物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述用于植物基因组定点修饰的载体组合物中所述用于植物基因组定点修饰的载体和所述供体DNA的摩尔比为1：20-1：40。

8.权利要求1-5中任一所述的载体组合物在植物基因组定点修饰中的应用；所述植物为单子叶植物。

9.权利要求1-5中任一所述的载体组合物在培育基因组被定点修饰的植物中的应用；所述植物为单子叶植物。

10.权利要求1-5中任一所述的载体组合物在培育抗除草剂植物中的应用；所述植物为单子叶植物。

11.权利要求1-5中任一所述的载体组合物在植物育种中的应用；所述植物为单子叶植物。

12.权利要求1-5中任一所述的载体组合物在转基因植物研究中，利用定点修饰后的ALS基因作为筛选标记基因的应用；所述植物为单子叶植物。