[发明专利]尼罗罗非鱼性别鉴定用引物及PCR鉴定方法在审
| 申请号： | 201510855662.1 | 申请日： | 2015-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN105368948A | 公开（公告）日： | 2016-03-02 |
| 发明（设计）人： | 李红霞;俞菊华;李建林;唐永凯;于凡;何杰 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 李纪昌 |
| 地址： | 214081*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 罗罗 性别 鉴定 引物 pcr 方法 | ||
1.一种尼罗罗非鱼性别PCR鉴定用引物，其特征在于，所述引物能够对尼罗罗非鱼的AMH 基因进行特异性扩增，雄性个体生成2条特异性扩增片段，长度分别为：179bp和412bp， 雌性个体生成1条长度为412bp的特异性扩增片段。
2.根据权利要求1所述的一种尼罗罗非鱼性别PCR鉴定用引物，其特征在于，引物的核苷 酸序列为：
正向：5’-CAGGAGGGAGTCAGTTCCGTG-3’
反向：5’-CTCTAGCGGCATCCACACTCC-3’。
3.权利要求1或2所述的一种尼罗罗非鱼性别PCR鉴定方法，其特征在于，该方法以尼罗 罗非鱼血液样品中提取的基因组DNA为模板，采用引物进行PCR扩增，并根据1.5％的 琼脂糖凝胶电泳判定结果。
4.根据权利要求3所述的一种尼罗罗非鱼性别PCR鉴定方法，其特征在于，PCR的反应体 系为：10×反应MIX液5μL，正反向引物各0.25μL，浓度为50ng/μL～100ng/μL的DNA 模板1μL，用灭菌双蒸水补足至10μL。
5.根据权利要求3所述的一种尼罗罗非鱼性别PCR鉴定方法，其特征在于，PCR的反应程 序为：预变性94℃、2min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；最 后72℃延伸5min，4℃保存。
6.一种尼罗罗非鱼性别PCR鉴定用试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的引物。
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