[发明专利]用于低频突变检测的二代测序文库的构建方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于DNA低频突变检测的二代测序DNA文库的构建方法，其包括：

步骤A：将希望进行测序的包含DNA低频突变的样本中的DNA片段进行末端修复，得到平末端DNA片段；

步骤B：将平末端DNA片段进行3'端加A，得到3'端加A的DNA片段；

步骤C：将所述3'端加A的DNA片段进行加接头，得到加接头DNA片段；以及

步骤D：将所述加接头DNA片段进行PCR扩增，得到扩增产物；

其中，

所述步骤C中使用核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的单链DNA与核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示的单链DNA的退火产物作为所述接头；

所述步骤D中使用核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的单链DNA、核苷酸序列如SEQ IDNO:4所示的单链DNA以及核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的单链DNA作为PCR扩增引物；且

该方法中仅在所述步骤D中进行一次PCR扩增；

所述低频突变是指在DNA样本中突变DNA比例低于1％的突变。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤A中的DNA片段的量为1～200ng。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤A中的DNA片段的量为5～50ng。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述步骤A与步骤B之间、所述步骤C与步骤D之间、和/或所述步骤D之后还包括对产物进行纯化的步骤。

5.一种用于构建用于DNA低频突变检测的二代测序DNA文库的试剂盒，其包含：

核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的单链DNA与核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的单链DNA，或者它们的退火产物；

核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的单链DNA；

核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的单链DNA；以及

核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的单链DNA。

6.一种检测DNA低频突变的方法，其包括：

步骤A：将希望进行测序的包含DNA低频突变的样本中的DNA片段进行末端修复，得到平末端DNA片段；

步骤B：将平末端DNA片段进行3'端加A，得到3'端加A的DNA片段；

步骤C：将所述3'端加A的DNA片段进行加接头，得到加接头DNA片段；

步骤D：将所述加接头DNA片段进行PCR扩增，得到扩增产物；以及

步骤E：对所述扩增产物进行二代测序，并基于测序结果进行生物信息学分析；

其中，所述步骤C中使用核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的单链DNA与核苷酸序列如SEQID NO:2所示的单链DNA的退火产物作为所述接头；

所述步骤D中使用核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的单链DNA、核苷酸序列如SEQ IDNO:4所示的单链DNA以及核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的单链DNA作为PCR扩增引物；且

该方法中仅在所述步骤D中进行一次PCR扩增。

7.一种用于检测DNA低频突变的试剂盒，其包含：

用于构建二代测序DNA文库的试剂，以及

用于对二代测序DNA文库进行上机测序的试剂；

其中，所述用于构建二代测序DNA文库的试剂包括：

核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的单链DNA与核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的单链DNA，或者它们的退火产物；

核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的单链DNA；

核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的单链DNA；以及

核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的单链DNA。