[发明专利]一种制备高效水解活力施氏假单胞菌的细胞固定化方法

说明书

本发明公开了一种制备高效水解活力施氏假单胞菌的细胞固定化方法，该方法是以海藻酸钠和聚乙烯醇（PVA）为基体，与施氏假单胞菌菌体的生理盐水悬浮液混合，混匀后注入CaCl₂溶液中，固化得到。本发明所述的施氏假单胞菌细胞固定化方法工艺简单，固定化细胞颗粒机械强度高，弹性好，水解活性高，在反应体系中耐受性强。本发明方法得到一种新型的具有高效水解活力的固定化施氏假单胞菌细胞催化剂。

技术领域

本发明属于生物工程技术应用领域，具体涉及一种制备高效水解活力施氏假单胞菌的细胞固定化方法。

背景技术

固定化细胞技术是用于获得细胞的酶和代谢产物的一种方法，是在固定化酶的基础上发展起来的新技术。由于固定化细胞能进行正常的生长、繁殖和新陈代谢，所以又称固定化活细胞或固定化增殖细胞。通过各种方法将细胞和水不溶性载体结合，制备固定化细胞的过程称为细胞固定化。

与游离的细胞相比，固定化的细胞具有显著的优点：1）固定化可以提高菌体的稳定性；2）固定化细胞易于分离进而简化产物的分离纯化；3）可以获得更高的细胞浓度；4）细胞的种类多种多样，大小和特性各不相同，故此细胞固定化的方法有很多种，固定化的方法主要有吸附法、包埋法、交联法。吸附法是利用各种吸附剂，将细胞吸附在其表面而使细胞固定的方法，用于细胞固定化的吸附剂主要有硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔塑料、金属丝网、微载体和中空纤维等。包埋法是将细胞包埋在多空载体内部而制成固定化细胞的方法，可分为凝胶包埋法和半透膜包埋法。交联法是依靠双功能团试剂使酶分子之间发生交联凝集成网状结构，使之不溶于水从而形成固定化酶，常采用的双功能团试剂有戊二醛、顺丁烯二酸酐等。

发明内容

本发明目的在于进一步优化现有技术，提供一种高效水解活力施氏假单胞菌细胞的固定化方法。

本发明通过以下技术方案来实现：

一种制备高效水解活力施氏假单胞菌的细胞固定化方法，包括以下步骤：

（1）施氏假单胞菌经活化培养、发酵培养得到菌液，菌液离心分离得菌体，菌体干燥备用；

（2）将步骤（1）得到的菌体接入经高压灭菌冷却的海藻酸钠与PVA的混合溶液中，混匀后注入搅拌的饱和硼酸-CaCl₂溶液中固定化，过滤得到小珠后用蒸馏水洗涤，再经冷冻干燥制得固定化施氏假单胞菌细胞催化剂。

进一步地，步骤（1）所述施氏假单胞菌为Pseudomonas stutzeri GIM1.273，购自广东省微生物研究所。

进一步地，步骤（1）所述发酵培养的培养基中各成分的质量体积分数为：葡萄糖0.1 %~5 %，酵母浸膏0.1 %~5 %，(NH₄)₂SO₄ 0.2 %~3 % g，K₂HPO₄ 0.02 %~1 %g，MgSO₄·7H₂O0.002 %~0.2 %，其余成分为水；培养基中初始pH值为6.0~8.0。

进一步地，步骤（1）所述发酵培养条件为温度20℃~40 ℃，转速120~200 r/min，震荡培养0.5 d~3 d。

进一步地，所述细胞固定化采用包埋法-交联法联合使用的方法。

进一步地，步骤（2）所述的海藻酸钠与PVA在混合溶液中的质量体积分数分别为0.5 %~8 %与 0 %~12 %。

进一步地，步骤（2）所述的海藻酸钠与PVA的混合溶液为固定化载体，其中固定化载体与施氏假单胞菌干重比为（50 ~ 250） : 1。