[发明专利]一种隐绿原酸的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种有机酸的制备方法，具体涉及一种隐绿原酸的制备方法。

背景技术

隐绿原酸即4-咖啡酰奎宁酸，属于单咖啡酰奎宁酸类化合物，是绿原酸(3-咖啡酰奎宁 酸)同分异构体。近年来，国内外学者就咖啡酰奎宁酸类化合物药理活性进行了深入研究， 发现其具有一些重要生物活性，如抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、抑制平滑肌收缩、降血脂 等，极具临床应用价值，有望在治疗病毒性肝炎及宫颈癌疾病中发挥重要的作用。但由于目 前此类化合物仅停留在是实验室研究阶段，还未见规模制备的方法技术，这样很大地限制了 此类化合物的深入研究开发。因此，对于此类化合物包括隐绿原酸的规模分离、纯化及制备 成为其深入开发的关键问题。

国内外关于隐绿原酸的分离纯化仅少数文献报道，许小方(许小方,李会军,李萍,冯煦, 袁昌齐.灰毡毛忍冬花蕾中的化学成分[J],中国天然药物,2006,4(1):45-47.)从15kg灰毡毛 忍冬中通过D101大孔树脂、SephadexLH-20、RP-C₁₈和重结晶等方法分离得到200mg隐绿原酸。 王琦(王琦.金银花的化学成分研究[D].沈阳药科大学,2008.)采用萃取、反复硅胶柱层析、 SephadexLH-20和重结晶等方法从280g金银花浸膏中分离得到隐绿原酸30mg。王岱杰(王岱 杰.忍冬叶化学成分及其抗H5亚型禽流感病毒研究[D].山东农业大学,2013.)从10kg忍冬叶中 通过MCI树脂、SephadexLH-20及制备液相等手段分离得到13mg隐绿原酸。然而，上述研究 中普遍存在一个问题，隐绿原酸都是在化学成分研究过程中发现的，这些方法并不是针对隐 绿原酸的分离、纯化和制备，具有随机性、重现性差，而且分离纯化步骤较繁琐，不适合大 规模分离制备。另外，由于隐绿原酸在植物中含量低，通过植物化学手段来分离得到的量非 常小，无法满足动物实验的研究应用。同时，也有报道国外学者采用化学合成隐绿原酸(张 亚梅.咖啡酰奎宁酸类化合物的合成研究[J].江西中医药,2012,8(43):78.)，但隐绿原酸通过奎 宁酸选择性酯化合成收率很低，且成本高，污染很大，未进入规模化生产，而国内无人问津， 所有以上均制约了其进一步的开发应用。

因此，很有必要在现有技术的基础之上，研究开发一种制备效率高，产率高，生产成本 低，具有很好应用前景的隐绿原酸的制备方法。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了解决现有技术的不足，经过大量实验筛选，提供优选的 隐绿原酸的制备方法。本发明提供的隐绿原酸的制备方法，以绿原酸为原料，采用优选的酸 处理工艺使绿原酸稳定的、高效的转化为隐绿原酸，并通过优选的工业制备色谱纯化方法， 将性质较接近的绿原酸和隐绿原酸等分离纯化，制备得到纯度高的隐绿原酸，工艺简单，步 骤简便，制备效率高，得率高，制备得到的隐绿原酸纯度高，整个过程生产成本低，可操作 性强，适合大规模制备，具有很好的应用前景。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采用如下技术方案：

一种隐绿原酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取绿原酸，加5～10倍量体积浓度为50％～80％甲醇溶解，加10～20倍量的1～ 2mol/L盐酸，于60℃水浴上搅拌反应6～8h，反应结束后冷却至室温，得反应液；

(2)反应液中加1～2mol/LNaOH溶液调pH至中性，50℃以下减压浓缩至干，加甲醇 溶解，析出白色固体滤过，滤液在50℃以下减压浓缩至干，加少量水溶解，滤过，得滤液；

(3)取滤液经反相C₁₈柱预处理，水洗，收集水洗液浓缩，离心，过0.45μm滤膜，反 相工业制备色谱法制备得到隐绿原酸。

作为优选方案，以上所述的隐绿原酸的制备方法，步骤(1)中，取绿原酸，加10倍量 体积浓度为50％甲醇溶解，然后加20倍量的1mol/L盐酸，然后于60℃水浴上搅拌反应6h， 反应结束后冷却至室温。

作为优选方案，以上所述的隐绿原酸的制备方法，反相工业制备色谱法的色谱条件为： 色谱柱为反相C18色谱柱(30～150×250～600mm))，流速为15～1000mL/min，波长为 326nm，流动相为乙腈(A)-0.5％甲酸溶液(B)，梯度洗脱，进样量1.0～20.0g。

实验例

(一)酸反应优选试验：