[发明专利]Bt蛋白表达系统有效
| 申请号： | 201510860891.2 | 申请日： | 2015-12-01 |
| 公开（公告）号： | CN105296522B | 公开（公告）日： | 2018-08-21 |
| 发明（设计）人： | 张杰;耿丽丽;束长龙;彭琦;宋福平;梁影屏 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N1/21;C12P21/02;C07K19/00;C07K1/18;C07K1/16;C12R1/07 |
| 代理公司： | 北京兆君联合知识产权代理事务所(普通合伙) 11333 | 代理人： | 胡敬红 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | bt 蛋白 表达 系统 | ||
1.Cry1Ab/Ac融合蛋白表达载体，其特征在于：所述表达载体通过在载体pHT315插入mcry1Ab/ac-C2序列获得，表达载体启动子为cry1Ac启动子，所述mcry1Ab/ac-C2序列如SEQID NO：6所示。
2.Bt蛋白表达系统，为转入权利要求1所述的Cry1Ab/Ac融合蛋白表达载体的苏云金芽胞杆菌菌株，所述苏云金芽胞杆菌菌株为无晶体蛋白的HD73-菌株。
3.权利要求1所述的Cry1Ab/Ac融合蛋白表达载体或权利要求2所述Bt蛋白表达系统在生产Cry1Ab/Ac融合蛋白中的应用。
4.权利要求3所述的应用，为采用权利要求2所述的Bt蛋白表达系统表达Cry1Ab/Ac融合蛋白，再经提取和纯化而得到。
5.权利要求4所述的应用，所述表达Cry1Ab/Ac融合蛋白包含将菌株置于1/2LB固体培养基中，30℃培养。
6.权利要求4所述的应用，所述纯化方法为将提取的Cry1Ab/Ac蛋白先经脱盐柱G-25脱盐，再将蛋白样品进行阴离子交换层析，最后再使用脱盐柱G-25进行脱盐。
7.权利要求6所述的应用，所述脱盐条件为：柱平衡缓冲液为50mM Na2CO3缓冲液，pH10.5；流速为2mL/min，阴离子交换层析条件为：柱平衡缓冲液为50mM Na2CO3缓冲液，pH10.5；流速为2mL/min，以0-100％的1M NaCl进行梯度洗脱。
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