[发明专利]一种植物萃取物复合益生菌分时发酵培养方法

权利要求书

1.一种植物萃取物复合益生菌分时发酵培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：一级种子液的制备

取下述重量配比的原料制备而成：

酵母浸粉100份、葡萄糖200份、蔗糖200份、氯化钠50份、磷酸氢二钾20份、硫酸镁5份、纯化水8625份；

按照上述原料配比配制一级种子培养基600ml，平均分装至6个三角瓶中，在温度121℃条件下灭菌30min，灭菌后的一级种子培养基冷却至37℃后备用；

一级种子培养基接种冻存菌种，分别接种动物双歧杆菌，嗜热链球菌，鼠李糖乳杆菌，置于37℃恒温培养箱中，静置培养；培养时间为24小时，得到动物双歧杆菌一级种子液、嗜热链球菌一级种子液、鼠李糖乳杆菌一级种子液，分别取样测定动物双歧杆菌一级种子液、嗜热链球菌一级种子液、鼠李糖乳杆菌一级种子液的pH值；动物双歧杆菌一级种子液pH值介于3.8-4.0之间，嗜热链球菌一级种子液pH值介于3.8-4.2之间，鼠李糖乳杆菌一级种子液pH值介于3.8-4.0之间，用于转接二级种子培养基；

步骤二：二级种子液的制备

取下述重量配比的原料制备而成：

深色焦香麦芽400份、小麦麦芽200份、黄豆400份、葡萄糖200份、酵母浸粉100份、氯化钠50份、磷酸氢二钾20份、硫酸镁5份、纯化水8625份；

按照上述配比称取深色焦香麦芽和小麦麦芽，先用水冲洗一遍，再加入五倍重量的水浸泡30min，然后微沸萃取一小时，8层纱布过滤，获得深色焦香麦芽和小麦麦芽萃取液；按上述配比称取黄豆，用温水浸泡24小时，待黄豆萌发出芽后冲洗干净，然后加五倍重量的水，微沸萃取1小时，8层纱布过滤，获得黄豆萃取液；按上述配比称取葡萄糖、酵母浸粉、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、纯化水，配制二级种子培养基12L，平均分装至3个三角瓶中，在温度121℃条件下灭菌30min，灭菌后的二级种子培养基冷却至37℃后备用；

二级种子培养基，按照1%接种量分别接种长好的动物双歧杆菌一级种子液、嗜热链球菌一级种子液、鼠李糖乳杆菌一级种子液，接种后置于37℃恒温培养箱中，静置培养，培养时间为24小时，得到动物双歧杆菌二级种子液、嗜热链球菌二级种子液、鼠李糖乳杆菌二级种子液，分别取样测定动物双歧杆菌二级种子液、嗜热链球菌二级种子液、鼠李糖乳杆菌二级种子液的pH值，当动物双歧杆菌二级种子液pH值介于3.5-3.8之间，嗜热链球菌二级种子液pH值介于3.8-4.0之间，鼠李糖乳杆菌二级种子液pH值介于3.5-3.8之间，用于转接发酵培养基；

步骤三：发酵培养基的制备及发酵

取下述重量配比的原料制备而成：

深色焦香麦芽300-600份、小麦麦芽100-300份、黄豆300-600份、葡萄糖100-300份、酵母浸粉50-200份、磷酸氢二钾10-50份、硫酸镁1-20份、纯化水7980-9139份；

按上述配比称深色焦香麦芽和小麦麦芽，先用水冲洗一遍，再加入五倍重量的水浸泡30min，然后微沸萃取一小时，8层纱布过滤，获得深色焦香麦芽和小麦麦芽萃取液；按上述配比称黄豆，用温水浸泡24小时，待黄豆萌发出芽后冲洗干净，然后加五倍重量的水，微沸萃取1小时，8层纱布过滤，获得黄豆萃取液；

将焦香麦芽萃取液、小麦麦芽萃取液、黄豆萃取液混合，转移至发酵罐中，称取上述配比的葡萄糖、酵母浸粉、磷酸氢二钾、硫酸镁、纯化水投入发酵罐中，搅拌均匀后纯化水定容至300L；

发酵培养基在温度121℃条件下灭菌时间30min，冷却至37℃后，灭菌的纯化水定容至400L，37℃保温备用；灭菌后测定发酵培养基pH值为6.0~6.2之间；

先将长好的动物双歧杆菌二级种子液按照1%接种量接种至发酵培养基中，接种后每两小时取样测定发酵液的pH值，在接种动物双歧杆菌后4-8小时后，发酵液pH值下降至5.0-5.4时，然后将长好的嗜热链球菌二级种子液和鼠李糖乳杆菌二级种子液按照1%接种量接种至上述发酵培养基中；并间隔两小时取样测定发酵液的pH值和计数发酵液中的总菌含量及动物双歧杆菌的含量；当发酵液的pH值下降至3.36-3.42时，发酵终止。

2.根据权利要求1所述的一种植物萃取物复合益生菌分时发酵培养方法，其特征在于：步骤一中，动物双歧杆菌一级种子液pH值为3.9，嗜热链球菌一级种子液pH值为4.04，鼠李糖乳杆菌一级种子液pH值为3.97，用于转接二级种子培养基。