[发明专利]一种以黄芪甲苷为配基的免疫亲和层析柱及其应用

权利要求书

1.一种以黄芪甲苷为配基的免疫亲和层析柱的制备方法，其特征在于，以黄芪甲苷为配基，具体步骤为：制备黄芪甲苷半抗原，由黄芪甲苷半抗原与固相载体交联制备免疫亲和吸附剂，以免疫亲和吸附剂为填料装入层析柱，用醋酸缓冲液和Tris-HCl缓冲液交替洗涤填料三次得免疫亲和层析柱。

2.根据权利要求1所述的一种以黄芪甲苷为配基的免疫亲和层析柱的制备方法，其特征在于，所述黄芪甲苷半抗原的制备方法，具体步骤为：

（1）将黄芪甲苷溶于80%甲醇中配成浓度为1mg/mL的黄芪甲苷溶液，即第一溶液；

（2）将NaIO₄溶于蒸馏水中，即第二溶液；

（3）用注射器将第一溶液缓缓滴加至第二溶液中，室温搅拌反应4小时，即第一反应液；

（4）慢慢往第一反应液中滴加乙二醇并室温反应2小时；

（5）终止反应，采用透析袋除去过量NaIO₄，得到黄芪甲苷半抗原。

3.根据权利要求1所述的一种以黄芪甲苷为配基的免疫亲和层析柱的制备方法，其特征在于，所述免疫亲和吸附剂的制备方法，具体步骤为：

（1）将黄芪甲苷半抗原与固相载体置于0.1MpH8.0的碳酸氢钠溶液中，

在20-25℃条件下反应4小时，即第二反应液；

其中：黄芪甲苷半抗原/固相载体/0.1MpH8.0的碳酸氢钠溶液其配比为：10mg:2g:20mL；

将第二反应液用1MpH8.0的乙醇胺水溶液在20-25℃条件下封闭2小时，得封闭液；

（2）封闭交联反应结束，用0.1MpH8.0的碳酸氢钠溶液洗涤（1）所得封闭液去除未结合的黄芪甲苷半抗原，得免疫亲和吸附剂。

4.根据权利要求3所述的一种以黄芪甲苷为配基的免疫亲和层析柱的制备方法，其特征在于，所述固相载体为琼脂糖凝胶、纤维素、葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、多孔玻璃或聚丙烯酰胺—琼脂糖凝胶中的一种。

5.根据权利要求4所述的一种以黄芪甲苷为配基的免疫亲和层析柱的制备方法，其特征在于，所述固相载体为经环氧氯丙烷活化的琼脂糖凝胶6B。

6.根据权利要求1所述的一种以黄芪甲苷为配基的免疫亲和层析柱的制备方法，其特征在于，所述免疫亲和层析柱的制备方法，具体步骤为：

将免疫亲和吸附剂装入层析柱，用0.1MpH4.0醋酸缓冲液和0.1MpH8.0Tris-HCl缓冲液交替洗涤三次，得到免疫亲和层析柱。

7.一种应用权利要求1-6任一项权利要求所述的免疫亲和层析柱纯化黄芪甲苷抗体的方法，其特征在于，具体步骤为：

（1）将待纯化样品加入到所述免疫亲和层析柱；

（2）用洗涤液洗涤至紫外分光光度计测定OD₂₈₀值至0.01以下；

（3）洗脱液洗脱；

（4）中和液中和；

所述洗脱液与中和液的体积比为300∶36。

8.根据权利要求7所述的免疫亲和层析柱纯化黄芪甲苷抗体的方法，其特征在于，所述洗涤液为0.1MpH4.0的含0.5MNaCl的醋酸缓冲液，该醋酸缓冲液制备方法为：取醋酸钠8.2g，醋酸1.04mL，NaCl29.22g，加水配成1000mL溶液。

9.根据权利要求7所述的免疫亲和层析柱纯化黄芪甲苷抗体的方法，其特征在于，所述洗脱液为0.1MpH8.0的含0.5MNaCl的Tris-HCl缓冲液，该Tris-HCl缓冲液制备方法为：取Tris12.114g，NaCl29.22g，加水配成1000mL溶液。

10.根据权利要求7所述的免疫亲和层析柱纯化黄芪甲苷抗体的方法，其特征在于，所述中和液为1MpH8.8Tris-HCl缓冲液，该缓冲液由如下制备步骤得到：称取Tris121.14g，加蒸馏水800mL，用0.1MHCl调pH至8.8，加蒸馏水至1000mL。