[发明专利]DC-CIK细胞的制备及其在制备治疗卵巢癌药物中的应用

权利要求书

1.DC-CIK细胞在制备杀伤卵巢癌干细胞药物中的应用，其特征在于，所述DC-CIK细胞通过下列方法制得：

(1)从卵巢癌病人经血中获得PBMC细胞：

收集卵巢癌病人的月经倒入内含抗凝液0.2ml的无菌离心管，加入等体积的PBS稀释；吸取稀释血液，加到PBMC分离液，使稀释血液叠于分层液上，保持两者界面清晰；所述稀释血液与分层液体积比例为2:1，于18℃-20℃，水平离心机以2000rpm 离心20min，离心后其中的内容物分为四层，上层为血浆内含血小板，中间层为分层液，底层为红细胞和粒细胞，在上、中层液体界面处即为乳白色混浊的PBMC层；吸取PBMC层液体，移入另一离心管中，加入5ml的PBS洗涤2次，1500rpm离心10min，吸弃上清，沉淀即为PBMC细胞；

(2)IL-2和IFN-γ刺激诱导CIK增殖：

A、DC细胞制备：步骤(1)得到的PBMC细胞，调整细胞浓度，使得每5ml反应体系中，PBMC细胞浓度为1×10⁵个/ml，将PBMC细胞于DMEM+10％胎牛血清+IL-2+IFN-γ的完全培养基中，IL-2用量为500U，IFN-γ用量为5000U，37℃培养12小时，即完成细胞刺激，得到细胞悬液，细胞悬液于1500rpm，离心5分钟，弃上清，沉淀用0.1ml的4℃ PBS重悬，并加入4μl异硫氰酸胍标记的兔抗人CD83单克隆抗体，一并混匀至反应终浓度为0.01mg/ml，于4℃避光反应30分钟；在原有的细胞悬液中再加入0.4ml PBS，流式细胞仪分选操作，即可获得DC细胞；

B、CIK细胞的制备：用与步骤A相同方法得到细胞悬液于1500rpm，离心5分钟，弃上清，沉淀用0.1ml的4℃PBS重悬，并加入4μl异硫氰酸胍标记的兔抗人CD3抗体和4μl碘化丙啶标记的鼠抗人CD56抗体，一并混匀至反应终浓度为0.01mg/ml，于4℃避光反应30分钟，将细胞悬液0.5ml，进行流式细胞仪分选操作，即可获得纯化的CIK细胞；

C、将上述步骤A获得的DC细胞与步骤B获得的CIK细胞以1:1比例混合，即为DC-CIK细胞。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物为由 DC-CIK 细胞作为活性成分与药用辅料组成的药物组合物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物组合物为注射剂。