[发明专利]一种基于SSR分子标记鉴别扁桃属植物种质的方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学的分子标记领域，具体涉及一种基于SSR分子标记鉴别扁 桃属植物种质的方法。

背景技术

扁桃，俗称巴旦杏，为蔷薇科李亚科桃属扁桃属植物，我国现有分布的扁桃属植物 种质资源包括野生和栽培种共6种，主要分布在新疆天山以南的喀什地区；新疆准葛尔盆地 西部的巴尔鲁克山、塔尔巴哈台山和阿尔泰山等山地；内蒙古乌拉山、大青山；宁夏贺兰山； 青藏高原东端等地。分别是普通扁桃Amygdalus.communisL.、新疆野扁桃 Amygdalus.ledebourianaSchlecht.、蒙古扁桃Amygdalus.mongolicaMoxim.、长柄扁桃 Amygdalus.pedunculataPall.、西康扁桃Amygdalus.tanguticaBatal.、榆叶梅 Amygdalus.triloba(Lindl)Ricker.。

扁桃作为普通扁桃栽培种的历史十分悠久，大约在4000年前，扁桃在其原产地西 亚地区就已被引种栽培。由于气候环境等条件的限制，目前在世界范围内只有中国新疆，美 国加利福利亚州，西亚的伊朗，南欧的意大利西班亚等地有栽培。我国栽培普通扁桃已有 1300多年的历史，主要分布在新疆天山以南喀什地区的英吉沙及莎车等地。由于长期的实 生繁殖和自然演化，形成了丰富的资源，栽培品种、品系以及优良单株有近百个，这些资源 形态各异，关系复杂，多数品种谱系不清，同名异物或同物异名的现象普遍，这给扁桃的分 类、栽培以及品种选育带来很大困难。

本发明重点立足于新疆的扁桃资源，包括分布于新疆的5个不同群体的新疆野扁 桃的类型，同时对引进栽培的美国扁桃品种资源(即所谓的美国大杏仁)及分布于我国的扁 桃属植物种进行SSR分子标记和聚类分析。SSR也称微卫星标记，是由长度为1－6个碱基的 基元，串联重复而成的，广泛分布于基因组中。SSR是基因组中变异最为迅速的序列，其串联 重复数的突变率很高，从而产生了很多等位基因，形成了SSR的高度多态性。SSR标记是基于 PCR扩增的分子标记，呈共显性，引物由待检物种的基因组序列开发而来，物种特异性强，不 易受内生及外源微生物基因组的影响，结果准确可靠，正是基于这些优点，国际植物品种权 保护组织(UPOV)于2007年将SSR与最新发展的SNP标记一起确定为构建DNA指纹数据库的标 记方法。

本发明旨在研究我国扁桃类植物种质包括引进的各个种、品种之间的亲缘关系。 建立一套简便、快速、可靠的扁桃属植物种质鉴定技术体系应用于该属种质资源的鉴定，进 行种质及品种权利保护，对于维护育种者和生产者的利益，保障该产业健康发展，具有重要 而现实的意义。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种基于SSR分子标记技术鉴别扁桃属植物种质的方法， 该方法通过选择多态性高的SSR引物，对国内外55份扁桃属植物种质材料进行SSR－PCR扩 增反应、电泳检测、统计分析。结果表明：使用筛选自核果类的100对SSR引物中的10对多态 性强的引物对扁桃属植物种质材料，包括国内外栽培品种及不同种的55个个体样本的基因 组DNA进行SSR-PCR扩增，获得了较好的扩增结果。10对引物共扩增出63条扩增条带，其中多 态带60条，多态率为95.2％。通过进行相似系数和聚类分析，遗传相似系数为0.4133－ 0.9600，平均相似系数为0.6867；聚类分析将些类种质材料划分为6个大类，55份扁桃类植 物种质间的遗传差异表明：不同种以及不同品种间的遗传距离不同，在相似系数小于0.68 时，大多数栽培品种聚为一类，栽培品种中，同一种源区的大多数栽培品种能聚类在一起。 普通栽培扁桃与新疆野扁桃间的亲缘关系比长柄扁桃、蒙古扁桃、西康扁桃以及榆叶梅间 的亲缘关系更近，为进一步区分扁桃类植物种质资源亲缘关系远近提供了重要途径。该方 法较之常规的形态学、细胞学、生化标记鉴定等传统方法更为简便、直观、真实，可方便地应 用于扁桃属植物种质区分、鉴定、查对、交换、管理、利用。其开放性更利于同行间的交流和 共享，为进一步的优良育种目的提供鉴定技术体系。

本发明提供一种基于SSR分子标记技术鉴别扁桃属植物种质的方法，按下列步骤 进行：

准备扁桃属植物种质材料：