[发明专利]一种复合微生物液体饲料添加剂及其制备方法

权利要求书

1.一种复合微生物液体饲料添加剂，其特征在于：它是将植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌分别进行单菌种培养，得到的种子培养液再分别进行发酵罐培养，最后把它们的培养液按重量百分比混合得到，所述制剂中植物乳杆菌的菌数≥3.0×10⁹cfu/ml，粪肠球菌的菌数≥3.0×10⁹cfu/ml，嗜酸乳杆菌的菌数≥3.0×10⁹cfu/ml，凝结芽孢杆菌的菌数≥3.0×10⁹cfu/ml，侧孢短芽孢杆菌的菌数≥3.0×10⁹cfu/ml，pH值为3.5～4.0。

2.根据权利要求1所述的复合微生物液体饲料添加剂，其特征在于，所述各菌种的种子培养液的重量百分数为：植物乳杆菌的种子培养液25％～35％，粪肠球菌的种子培养液15％～20％，嗜酸乳杆菌的种子培养液25％～35％，凝结芽孢杆菌的种子培养液15％～25％，侧孢短芽孢杆菌的种子培养液10％～15％。

3.根据权利要求1所述的复合微生物液体饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)种子培养液的制备：

植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌种子培养液的制备：分别将植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌在无菌条件下接种于第一液体培养基中，PH调至7.2～7.5，35℃～37℃培养15～18小时，分别得到培养后的植物乳杆菌的种子培养液含量≥3.0×10⁹cfu/ml，培养后的粪肠球菌的种子培养液含量≥3.0×10⁹cfu/ml，培养后的嗜酸乳杆菌的种子培养液含量≥3.0×10⁹cfu/ml；

凝结芽孢杆菌种子培养液的制备：将凝结芽孢杆菌在无菌条件下接种于第二液体培养基中，pH调至7.2～7.5，40℃～45℃培养42～44小时，得到培养后的凝结芽孢杆菌的种子培养液含量≥3.0×10⁹cfu/ml；

侧孢短芽孢杆菌种子培养液的制备：将侧孢短芽孢杆菌在无菌条件下接种于第三液体培养基中，pH调至7.2～7.5，35℃～37℃培养46～48小时，得到培养后的侧孢短芽孢杆菌的种子培养液含量≥3.0×10⁹cfu/ml；

(2)复合微生物液体饲料添加剂的制备

分别将步骤(1)制备得到的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌在无菌条件下分别接种于第一培养基中，pH调至7.2～7.5，接种量为培养基重量的2％，在35℃～37℃的发酵罐中静置培养24～26小时；

凝结芽孢杆菌种子液在无菌条件下接种于第二液体培养基中，接种量为培养基重量的2％，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，40℃～45℃培养40～44小时，使菌体芽孢出孢率达40％，pH值为4.0～4.5，侧孢短芽孢杆菌的种子液在无菌条件下接种于第三液体培养基中，pH调至7.2～7.5，接种量为培养基重量的2％，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，35℃～37℃培养36～40小时，使菌体芽孢出孢率达40％，pH值为6.0～7.0；

把制备得到的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌的培养液按其重量百分数为：植物乳杆菌的培养液25％～35％，粪肠球菌的培养液15％～20％，嗜酸乳杆菌的培养液25％～35％，凝结芽孢杆菌的培养液15％～25％，侧孢短芽孢杆菌的培养液10％～15％混合得到的一种复合微生物液体饲料添加剂。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的第一液体培养基的各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：葡萄糖20.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的第二液体培养基的各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、酵母粉10.0g、葡萄糖6.0g、硫酸镁1.0g、磷酸二氢钾2.0g。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的第三液体培养基的各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、牛肉膏3.0g、氯化钠5.0g。