[发明专利]一种达肝素钠的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域中的原料药制备，其涉及一种达肝素钠的制备方法。

背景技术

达肝素钠是一种低分子肝素钠盐，达肝素钠为低分子量的肝素钠，适用于血液透析的预防凝血和深静脉血栓的治疗；不稳定型冠状动脉疾病；预防与手术有关的血栓形成。临床研究的数据显示，达肝素对老年患者的疗效及安全性与年轻患者无总体差别。与普通肝素钠比，达肝素在药理学和药代动力学方面都有诸多优势，包括：可预测抗凝效果；高生物利用度和长的血浆半衰期；剂量可靠，安全性好等。

目前国内在达肝素钠的纯化技术上主要有离子交换层析法，分子排阻法，以及超滤等方法。离子交换层析与分子排阻法得到的达特肝素钠虽然产品质量较高，但操作步骤繁琐，纯化周期长，成本高，仅适用于少量的达肝素钠进行纯化，无法实现工业化生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种达肝素钠的制备方法，采用本发明方法得到的精品达肝素钠收率明显提高，方法简单易行，生产用时少，成本低，适宜工业化生产，具有重要的应用前景。本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

一种达肝素钠的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

（1）降解：将肝素钠溶解并降解，得到肝素钠降解液；

（2）还原：将肝素钠降解液用还原剂进行还原，得到还原液；

（3）酶解：将上述还原液用盐酸溶液调pH，升到一定温度后加入酶开始保温一定时间；

（4）乙醇沉淀：加入乙醇，不断搅拌；

（5）超滤：将乙醇沉淀物溶解，溶解液用超微滤膜进行超滤；

（6）乙醇再沉淀：用氢氧化钠调节pH，加入乙醇，不断搅拌；

（7）脱水干燥：用乙醇脱水干燥，得到精品达肝素钠。

步骤（1）中，在10-20分钟内迅速升温至80-90℃，并保持30-60分钟，不断搅拌。使肝素钠降解更完全，且缩短生产用时。

步骤（2）中，向肝素钠降解液中加入氢氧化钠至pH为11-12终止降解反应，再加入还原剂连二亚硫酸钠或焦亚硫酸钠或两者混合还原3-5小时，然后调节PH至6.0-8.0，即得到还原液，还原剂的量为肝素钠重量的0.5-1.0％。减少还原剂的用量。

步骤（3）中，将上述还原液用盐酸溶液调pH7.5-8.5，升温到55-60℃之间后加入胰蛋白酶4-8g/亿单位，再加入8-16g/亿单位胃蛋白酶，55-60℃保温3-5小时。

步骤（5）中加入超滤液体积2-3倍的95%乙醇再沉淀10-14小时。

本发明提供了一种达肝素钠的制备方法，其主要具有的有益效果为：

本发明通过快速升温使肝素钠得到充分降解，缩短生产用时，且肝素钠收率明显提高，达肝素钠质量有明显提高，且方法简单易行。

此外，该方法生产用时少，条件温和，对设备要求低，成本低，方法中用到的多种化学试剂均低于现有工业生产中的用量及成本，非常适合应用于工业化生产中，具有重要的应用前景。

具体实施方式

一种达肝素钠的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

（1）降解：将肝素钠溶解并降解，得到肝素钠降解液；（2）还原：将肝素钠降解液用还原剂进行还原，得到还原液；（3）酶解：将上述还原液用盐酸溶液调pH，升到一定温度后加入酶开始保温一定时间；（4）乙醇沉淀：加入乙醇，不断搅拌；（5）超滤：将乙醇沉淀物溶解，溶解液用超微滤膜进行超滤；（6）乙醇再沉淀：用氢氧化钠调节pH，加入乙醇，不断搅拌；（7）脱水干燥：用乙醇脱水干燥，得到精品达肝素钠。

实施例：

1.向反应罐中加入肝素钠30kg，再加入纯化水100L使其全溶，用1mol/L的醋酸调节PH至6.5，控制温度在35℃左右，加入100g亚硝酸钠。加热，迅速升温至80℃，保持30分钟，并不断搅拌，通冷凝水冷却至室温，得到肝素钠降解液；

2.向肝素钠降解液中加入氢氧化钠至pH为11终止降解反应，再加入还原剂焦亚硫酸钠200g还原3小时，然后调节PH至6.5，即得到还原液；

3.将上述还原液用盐酸溶液调pH8.0，升温到55℃之间后加入胰蛋白酶400g，再加入800g胃蛋白酶，55℃保温4小时；

4.向还原液中加入95%乙醇沉淀至乙醇度为65%，进行沉淀；

5.将上述沉淀物溶解，溶解液再用超微滤膜进行超滤；

6.超滤后超滤液调节pH至6.5，加入超滤得到的超滤液体积3倍的95%乙醇沉淀10小时，用乙醇脱水干燥得到精品达肝素钠27.8kg。经检测重均分子量为5800，抗Xa/抗IIa比值为2:1，符合生产要求。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。