[发明专利]一种ECCE-CIK细胞培养方法及ECCE-CIK细胞制剂

权利要求书

1.一种ECCE-CIK细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）分离人外周血单核细胞；

2）制备PBMC细胞悬液；

3）激活PBMC；

4）培养激活后的细胞；

5）收集细胞；

所述步骤3）激活PBMC的方法为：在步骤2）制备的PBMC细胞悬液中加入IFN-γ、ECCE细胞，培养；然后再加入anti-CD3单克隆抗体、IL-2继续培养。

2.根据权利要求1所述ECCE-CIK细胞培养方法，其特征在于，步骤3）中加入IFN-γ使其终浓度为1000-2000U/mL，加入ECCE细胞至其终浓度为10⁵-10⁶个ECCE细胞/mL。

3.权利要求1所述的ECCE-CIK细胞培养方法，其特征在于，所加入的ECCE细胞经伽马射线灭活，所述伽马射线灭活为用100Gy的伽马射线照射ECCE细胞30min。

4.根据权利要求1所述ECCE-CIK细胞培养方法，其特征在于，步骤3）中anti-CD3单克隆抗体终浓度50-100ng/mL、IL-2终浓度300-1000U/mL。

5.根据权利要求1所述ECCE-CIK细胞培养方法，其特征在于，步骤3）中所述培养条件为：培养温度37℃、CO₂体积浓度为5%、湿度100%。

6.根据权利要求1所述ECCE-CIK细胞培养方法，其特征在于，步骤1）中所述的分离人外周血单核细胞是采用Ficoll密度梯度离心法。

7.根据权利要求1所述ECCE-CIK细胞培养方法，其特征在于，步骤2）中所述的制备PBMC细胞悬液是用无血清淋巴细胞培养液将PMBC浓度调整到1.0*10⁶个/mL浓度接种于培养瓶中。

8.根据权利要求1所述ECCE-CIK细胞培养方法，其特征在于，步骤4）中所述的培养激活后的细胞是指根据细胞增殖的速度，每2-3天添加含有IL-2的无血清淋巴细胞培养液，IL-2终浓度为300-1000U/mL。

9.根据权利要求1所述ECCE-CIK细胞培养方法，其特征在于，步骤5）中所述的收集细胞是指培养至14-21天后，离心，弃上清，用冻存液冻存细胞，置于液氮中保存。

10.一种ECCE-CIK细胞制剂，包括由权利要求1至9中任意一项所述ECCE-CIK细胞培养方法培养得到的ECCE-CIK细胞。