[发明专利]一种喹诺酮类药物胶体金免疫层析检测试纸条

权利要求书

1.一种喹诺酮类药物胶体金免疫层析检测试纸条，其特征在于：该试纸条包括样品垫、 金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫、底板；样品垫的材料选自玻璃纤维、滤纸纤维或聚脂膜，金 标垫的金标抗体支持膜选自玻璃纤维、滤纸纤维或聚脂膜，吸收垫选用吸水滤纸，底板选用 带不干胶的PVC板；底板上以样品垫为起始端，依次重叠粘贴固定有样品垫、金标垫、带有 检测线和质控线抗体的硝酸纤维素膜、吸收垫。

2.根据权利要求1所述的喹诺酮类药物胶体金免疫层析检测试纸条，其特征在于：抗 环丙沙星的抗体为单克隆抗体；质控线抗体根据金标抗体的来源可选择羊抗兔、鼠抗兔、兔 抗羊、羊抗鼠、兔抗鼠的IgG或葡萄球菌A蛋白。

3.根据权利要求1所述的喹诺酮类药物胶体金免疫层析检测试纸条，其特征在于：所 述的试纸条是由包被了抗环丙沙星单克隆抗体胶体金标记物的金标垫、包被了环丙沙星牛 血清蛋白人工抗原和兔抗鼠IgG或葡萄球菌A蛋白或葡萄球菌G蛋白的硝酸纤维素膜、样品 垫、吸水纸、底板组成。

4.一种喹诺酮类药物胶体金免疫层析检测试纸条的制备方法，其特征在于：该试纸条 的制备步骤包括：（1）制备抗环丙沙星单克隆抗体或多克隆抗体；（2）制备纳米胶体金颗粒； （3）制备抗环丙沙星单克隆抗体的纳米胶体金标记物，形成金标抗体；（4）将金标抗体均匀 喷涂到金标抗体支持膜上，经干燥制备金标垫；（5）将抗环丙沙星单克隆抗体喷涂到硝酸纤 维素膜上的检测线位置作为检测线捕获抗体，抗金标抗体的二抗或葡萄球菌A蛋白喷涂到 硝酸纤维素膜上的质控线位置作为质控线捕获抗体，并封闭硝酸纤维素膜上的空白位点； （6）将吸收垫、带有检测线和质控线抗体的硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫、底板组装成胶体 金免疫层析检测试纸条。

5.根据权利要求4所述的一种喹诺酮类药物胶体金免疫层析检测试纸条的制备方法， 其特征在于：具体方法包括如下：

（1）抗环丙沙星单克隆抗体的制备：通过CPFX-BSA抗原免疫Balb/c小鼠，制备脾细胞悬 液、骨髓瘤细胞悬液；将脾细胞与骨髓瘤细胞经过细胞杂交融合，筛选阳性单克隆细胞孔； 经进一步的阳性克隆化及其筛选，建立抗环丙沙星菌阳性、特异性好的细胞株1株，命名为 5G4，取杂交瘤细胞株5G4在培养后腹腔注射Balb/c小鼠制备腹水，并经过纯化获得抗环丙 沙星单克隆抗体5G4；

（2）纳米胶体金颗粒的制备：将100mL0.01wt％氯金酸用1mL1wt％柠檬酸三钠制备 纳米胶体金颗粒溶液；

（3）抗环丙沙星单克隆抗体5G4的胶体金标记物制备：用0.1mol·LK₂CO₃将上述胶体金 颗粒溶液的pH值调至8.5，将纳米胶体金颗粒溶液与抗环丙沙星单克隆抗体5G4按100mL胶 体金颗粒溶液加入0.2mg单克隆抗体的比例混合均匀，并使胶体金与抗体形成稳定的胶体 金复合物，在通过纯化、浓缩后形成胶体金标记物；

（4）将步骤（3）抗环丙沙星单克隆抗体5G4胶体金标记物喷涂在金标垫上，将CPFX-BSA 抗原和兔抗鼠IgG分别喷涂在硝酸纤维素膜的检测线和质控线位置上，在37℃干燥箱烘干；

（5）将喷涂有检测线与质控线抗体的硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫、吸水纸依次粘在 底板上；

（6）将依次粘好的底板材料切成裁切成宽×长为0.35cm×6cm的长条即为喹诺酮类药 物胶体金免疫层析检测试纸条，包装备用。

6.一种如权利要求1所述的喹诺酮类药物胶体金免疫层析检测试纸条的应用，其特征 在于：该试纸条应用于检测环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、氧氟沙星、甲磺酸培氟沙星、甲 磺酸达氟沙星、盐酸二氟沙星、盐酸沙拉沙星、伊诺沙星和司帕沙星11种喹诺酮类药物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：该检测步骤如下：

（1）取80-150μL待检样本加在检测试纸条的加样区；

（2）在20min内观察检测结果。