[发明专利]一种喹诺酮类药物胶体金免疫层析检测试纸条

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体涉及一种喹诺酮类药物的胶体金免疫层析检测试 纸条。

背景技术

喹诺酮类（Quinolones，QNs）药物，又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是一类较新的广 谱抗菌药。在化学结构上，QNs属于吡酮酸衍生物（Pyridonecarboxylicacids，PCAs）。QNs 作为一类全化学合成的抗菌药物，具有抗菌活性强、抗菌谱广、吸收快、体内分布广泛等优 点，价格与疗效相当的抗生素相比较为低廉，已被广泛应用于人和动物的多种感染性疾病 治疗中。国内动物产业对QNs类药物的需求量极大，每年的用量在500吨以上，并且市场需求 量仍处于快速增长阶段。由于近年来环境恶化，水产养殖动物病害频发，致使QNs药物过度 使用现象严重，水产品中QNs药物残留超标已对水产养殖业造成了极大的负面影响。

目前，对水产品中QNs残留的检测方法包括微生物法、高效液相色谱法、液相色谱- 串联质谱法、毛细管电泳分析法、免疫分析法等。HPLC和LC-MS作为实验室检测QNs的常规方 法具有高准确性、高精确性和高灵敏度，但需要繁琐的样品处理步骤、昂贵的仪器以及专业 的操作技能，因此不适宜用来检测大批样品及推广使用。

胶体金免疫层析技术由于其快速、便捷，不需特殊设备，结果判断直观等优势，越 来越受到人们的重视。本发明利用单克隆抗体和胶体金标记技术建立喹诺酮类胶体金免疫 层析快速检测方法。

发明内容

本发明的目的在于公开一种喹诺酮类药物的胶体金免疫层析检测试纸条，具体为 一种快速检测11种喹诺酮类药物（环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、氧氟沙星、甲磺酸培氟沙 星、甲磺酸达氟沙星、盐酸二氟沙星、盐酸沙拉沙星、伊诺沙星和司帕沙星等）胶体金免疫层 析试纸条，并提供该试纸条的制备方法，具有特异、准确、快速、操作简单、高通量检测的优 势。应用该试纸条检测喹诺酮类药物全过程不超过15min。

本发明一种喹诺酮类药物的胶体金免疫层析检测试纸条，该试纸条包括样品垫、 金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫、底板；样品垫的材料选自玻璃纤维、滤纸纤维或聚脂膜，金 标垫的金标抗体支持膜选自玻璃纤维、滤纸纤维或聚脂膜，吸收垫选用吸水滤纸，底板选用 带不干胶的PVC板。底板上以样品垫为起始端，依次重叠粘贴固定有样品垫、金标垫、带有 检测线和质控线抗体的硝酸纤维素膜、吸收垫。抗环丙沙星的抗体为单克隆抗体；质控线抗 体根据金标抗体的来源可选择羊抗鼠、兔抗鼠的IgG或葡萄球菌A蛋白。

具体是由包被了抗环丙沙星单克隆抗体胶体金标记物的金标垫、包被了环丙沙星 牛血清白蛋白人工完全抗原（CPFX-BSA）和兔抗鼠IgG或葡萄球菌A蛋白或葡萄球菌G蛋白的 硝酸纤维素膜、样品垫、吸水纸、底板等组成，底板上以样品垫为起始端，依次重叠粘贴固定 有样品垫、金标垫、带有检测线和质控线抗体的硝酸纤维素膜、吸水纸。

为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案如下：

该试纸条的制备步骤包括：（1）制备抗环丙沙星单克隆抗体；（2）制备纳米胶体金颗粒； （3）制备抗环丙沙星单克隆抗体的纳米胶体金标记物，形成金标抗体；（4）将金标抗体均匀 喷涂到金标抗体支持膜上，经干燥制备金标垫；（5）将抗环丙沙星单克隆抗体喷涂到硝酸纤 维素膜上的检测线位置作为检测线捕获抗体，抗金标抗体的二抗或葡萄球菌A蛋白喷涂到 硝酸纤维素膜上的质控线位置作为质控线捕获抗体，并封闭硝酸纤维素膜上的空白位点； （6）将吸收垫、带有检测线和质控线抗体的硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫、底板组装成胶体 金免疫层析检测试纸条。

具体包括如下：

（1）抗环丙沙星单克隆抗体的制备：通过CPFX-BSA抗原免疫Balb/c小鼠，制备脾细胞悬 液、骨髓瘤细胞悬液；将脾细胞与骨髓瘤细胞经过细胞杂交融合，筛选阳性单克隆细胞孔； 经进一步的阳性克隆化及其筛选，建立抗环丙沙星菌阳性、特异性好的细胞株1株，命名为 5G4。取杂交瘤细胞株5G4在培养后腹腔注射Balb/c小鼠制备腹水，并经过纯化获得抗环丙 沙星单克隆抗体5G4；

（2）纳米胶体金的制备：将100mL0.01％氯金酸用1mL1％柠檬酸三钠制备纳米胶体 金颗粒溶液；