[发明专利]一种从发酵液中提取并纯化米尔贝霉素的方法

说明书

本发明公开了一种从发酵液中提取并纯化米尔贝霉素的方法。首先将米尔贝霉素发酵液絮凝、过滤，得菌丝渣；用非水溶性溶剂萃取菌丝渣，萃取液依次进行酸洗、浓缩、碱处理，再进行二次萃取；然后酸洗、降温沉淀，过滤取滤液上硅胶柱层析；解吸液进行衍生处理，二次硅胶柱层析，结晶，分离，到米尔贝霉素衍生物；将衍生物水解、萃取、浓缩、结晶、干燥，得到米尔贝霉素A3和A4含量大于80％的米尔贝霉素。该方法对生产设备的要求较低，条件温和，简单易操作，获得的米尔贝霉素纯度高，适宜进行规模化生产，经济效益明显。

技术领域

本发明涉及生物农药的提取、纯化方法，具体涉及从发酵液中提取米尔贝霉素，继而对其进行纯化，获得高纯度的米尔贝霉素的方法。

背景技术

米尔贝霉素(milbemycins)于1967年由日本的sankyo公司的Aoki等人从Streptomyceshygroscopicussugsp,aureolacrimosus发酵液中分离出的一种具有十六环内酯混合物的抗生素。米尔贝霉素对各种螨类都有较高的防治效果。该天然产物的20种组分大多数对农业害虫具有广谱防治活性，如蚜、螨、黄褐天幕毛虫、肠道寄生虫以及其他危害作物及家畜的寄生虫。该药对害虫作用强烈，用药量少，对人畜安全，不污染环境，只杀害虫，不伤害天敌，也不易产生抗性，是目前最有前途的广谱、高效、新型无交叉抗性的生物杀虫剂。

通过多年的结构改良，于1986年正式以商品名米尔贝肟(Milbemycin oxime)上市。米尔贝肟是米尔贝霉素A3和米尔贝霉素A4的肟衍生物，米尔贝肟的使用收到了很好的效果。有专家预测，它可以替代目前用于作物保护的有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯类及有机氯类化合物。

目前米尔贝肟的主要制备途径是：从发酵液中提取米尔贝霉素A3和A4，然后经过半合成得到米尔贝肟。要进一步提高和推广米尔贝肟的使用，目前需主要从三方面进行技术改进：1、对菌种、发酵工艺进行改良，提高发酵液中米尔贝霉素A3和A4的单位；2、对A3和A4的提取、纯化工艺进行改进以提高收率和质量；3、改进半合成工艺，提高合成收率。通过三个生产阶段的技术提高，降低米尔贝肟的生产成本，为推广米尔贝肟在作物保护中的使用打下良好基础。

目前关于米尔贝霉素，公开的专利和专利申请主要集中在两个方面：1、对于米尔贝霉素进行半合成的结构改良的工艺研究；2、对结构改良后的衍生物的制剂工艺及其使用方法研究。尚未见到关于从发酵液中提取、纯化米尔贝霉素的专利研究报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从发酵液中提取并纯化米尔贝霉素的方法，尤其是米尔贝霉素的A3和A4两个组分。本发明的技术方案如下：

一种从发酵液中提取并纯化米尔贝霉素的方法，包括以下步骤：

1)将米尔贝霉素发酵液进行絮凝、过滤，得到菌丝渣；

2)用非水溶性溶剂萃取菌丝渣，得到一次萃取液；

3)将一次萃取液依次进行酸洗、浓缩、碱处理，然后用二次萃取溶剂萃取，得到二次萃取液；

4)对二次萃取液进行酸洗，降温沉淀，过滤取滤液得一次纯化上柱液；

5)用硅胶柱层析分离一次纯化上柱液，收集得一次层析液；

6)对一次层析液中的米尔贝霉素进行衍生处理，然后用碱洗涤，浓缩，结晶，干燥晶体，再将晶体溶解，过滤取滤液得衍生纯化上柱液；

7)用硅胶柱层析分离衍生纯化上柱液，收集得二次层析液；

8)浓缩二次层析液，结晶，分离，得到米尔贝霉素衍生物晶体；

9)将米尔贝霉素衍生物水解、萃取、浓缩、结晶、干燥得到米尔贝霉素A3和A4含量大于80％的米尔贝霉素。