[发明专利]检测非综合症型耳聋基因多态性的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子诊断技术领域，具体涉及一种焦磷酸测序法检测非综合症型耳聋基因多态性的试剂盒及其应用。

背景技术

耳聋是一组临床异质性很高的疾病，发病年龄、严重程度及损害部位各不相同，60％以上的耳聋与遗传因素有关，其中80％为无其他临床症状的非综合性耳聋(NSHI)。人类基因组计划极大地推动了遗传性耳聋病因学研究，近年来国内外科学家通过大量研究发现，大多数遗传性耳聋属于单基因病。迄今为止，已发现400多个伴有听觉障碍的综合征，鉴定出与之相关的遗传缺陷30多个，而在非综合性遗传性耳聋中，已定位了100多个致病位点，克隆了70多个耳聋基因。国内自2004年起进行了全国范围的聋病分子流行病学调查，结果发现21％的聋人带有GJB2基因突变、14.5％的聋人带有SLC26A4基因突变、3.8％和0.6％的聋人分别带有线粒体DNAA1555G和C1494T突变，另有6％的正常人群携带致聋突变。其中GJB2基因的突变与NSHI密切相关，该基因主要功能是编码缝隙连接蛋白Connexin26，与常染色体显性遗传性耳聋DFNA3和常染色体隐性遗传性耳聋DFNB1也有关，其突变是非综合征型常染色体隐性遗传性语前聋的主要原因，故称其为耳聋易感基因。GJB3基因也是间隙连接蛋白基因家族中的一种，该基因突变不仅能导致常染色体显性非综合征型聋，也能导致常染色体隐性非综合征型聋。临床多表现为高频听力受损的进行性语后聋。SLC26A4基因(PDSgene)是Pendred综合征(又称耳聋-甲状腺肿综合征)的致病基因，SLC26A4基因与GJB2基因是常染色体隐性遗传耳聋家庭产前诊断的主要对象。由其突变导致的前庭水管扩大是内耳最常见的畸形，表现为波动性或进行性感音神经性听力损失，程度达重度到极重度；发病多在儿童时期，发病前常有颅内压增高的诱发因素。12SrRNA基因与儿科临床联系较密切，该基因突变的携带者在使用了氨基糖苷类抗生素后极易致聋。12SrRNA基因的遗传方式为线粒体遗传，特点是女性能将突变的基因传给儿子和女儿，但只有女儿能传给下一代。故线粒体遗传也称母系遗传。

以上这几个基因是我国聋病分子流行病学调查结果，是导致中国大部分非综合征性遗传性耳聋(NSHI)的几个最常见的致病基因，通过对以上基因进行检测，可以诊断近60％的遗传性耳聋。检测出耳聋患者及其家属是否携带目前研究的耳聋热点基因，有助于提高新生儿聋病和高危聋儿的检出率，扩大耳聋的防治与干预范围。对于语前聋患者可以做到早发现早治疗，尽早利用残余听力配戴助听器或植入电子耳蜗，使患儿聋而不哑；对于语后聋患者，可以部分预测以后发病的风险和发病的年龄阶段，从而尽早预防，并对患者的婚配、生育提供遗传信息；对于有线粒体基因突变的患者，可以避免使用氨基糖苷类等耳毒性药物，防止药物性耳聋。总之，通过基因检测，有利于优生优育，提高人口素质。

目前，国内已运用基因芯片技术开展了耳聋基因检测，但其昂贵的检测成本不能为广大民众所接受。一代测序方法Sanger测序亦可对耳聋基因进行检测，但其也存在着检测时间长，检测费用昂贵的缺点。

焦磷酸测序(Pyrosequencing)技术是新一代DNA序列分析技术，被广泛用于基因型分析领域。该技术无须进行电泳，DNA片段也无须特殊的荧光标记，操作极为简便。本发明旨在建立一种基于焦磷酸测序技术的快速、准确和高通量的非综合性耳聋相关基因多态性检测方法。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是，提供一种操作简便、成本低廉、快捷、准确的检测非综合症型耳聋基因多态性的试剂盒。

本发明还要解决的技术问题是提供上述试剂盒的应用。

为解决以上技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种检测非综合症型耳聋基因多态性的引物，包括如下引物：

扩增GJB2基因的引物对：其上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；

扩增GJB3基因的引物对：其上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：4所示；

扩增SLC26A4-1基因的引物对：其上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：5所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：6所示；

扩增SLC26A4-2基因的引物对：其上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：7所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：8所示；