[发明专利]一种肺癌检测质控品及其制备方法

权利要求书

1.一种肺癌检测质控品，其特征在于：所述肺癌检测质控品为肺癌细胞系H3122、肺癌细胞系H2228和肺癌细胞系H1299分别接种小鼠后生成的肿瘤组织的标本切片；其中肺癌细胞系H3122和H2228为EML4-ALK融合基因阳性但型别不同的肺癌细胞系，肺癌细胞系H1299为EML4-ALK融合基因阴性的肺癌细胞系；其中，H3122细胞系存在EML413号外显子和ALK 21号外显子的融合EML4-ALK V1；其核苷酸序列的测序结果如SEQ ID No.1所示；H2228细胞系存在EML4-ALK V3a和EML4-ALK V3b两种亚型，其核苷酸序列的反向测序结果如SEQ IDNo.2所示，正向测序结果如SEQ ID No.3所示。

2.根据权利要求1所述的肺癌检测质控品，其特征在于：所述标本切片采用以下方法制备：

（1）培养肺癌细胞系；

（2）建立肿瘤动物模型；

（3）制备肺癌质控品。

3.根据权利要求2所述的肺癌检测质控品，其特征在于： 所述步骤（1）培养肺癌细胞系是指：肺癌细胞系H3122、肺癌细胞系H2228、肺癌细胞系H1299，分别用含10%胎牛血清RPIM-1640培养液培养,培养基中含有10%胎牛血清,100IU/ml青霉素和100IU/ml链霉素；在37℃含5% CO2的恒温细胞培养箱中培养，用0.25%胰蛋白酶消化进行细胞传代，将三种细胞系扩大培养至10⁷-10⁸并处于对数生长期。

4.根据权利要求2所述的肺癌检测质控品，其特征在于： 所述步骤（2）建立肿瘤动物模型的步骤为：

（1）准备若干只Beige SCID小鼠和裸小鼠，Beige SCID小鼠用于H2228致瘤，裸小鼠用于H3122和H1299致瘤；

（2）细胞消化准备：倒掉旧培养基，向培养瓶中加入1xPBS 2ml，清洗2-3次；加入2ml胰酶，放入37°C、5% CO2 孵箱孵2min；待大部分细胞被消化下来，立即加入4ml培养基终止胰酶的消化作用；用一次性巴氏吸管将细胞吹打混匀，待在镜下观察细胞大部分成单个后转入50ml离心管中，离心，弃去上层培养基，加入2ml PBS，吹打混匀，离心，弃去上清液，加入1ml PBS，吹打混匀细胞，形成细胞悬液，转入2ml 冻存管中；

(3)动物接种：将所得1.5ml细胞悬液吹打混匀，分别使用1ml注射器吸取0.2ml细胞悬液，皮下接种到裸小鼠两侧腋下每侧0.2ml，将三只接种的裸小鼠放回SPF隔离器中；每周观察一次，待瘤长至8至10cm时处死小鼠。